新的CRISPR工具靶向哺乳动物细胞中的RNA
麻省理工学院和哈佛大学广泛研究所的研究人员表明,基于CRISPR的编辑系统可以切割和结合哺乳动物细胞中的RNA。本周在“ 自然”杂志的一篇论文中,研究小组使用CRISPR-Cas13(研究人员帮助发现)降低RNA水平和“标记”RNA,以便在细胞内观察和追踪它们。研究人员之前使用CRISPR-Cas13靶向细菌细胞中的RNA,但证明该系统可以在哺乳动物细胞中安全有效地工作,这是使用该系统研究人类生物学和疾病的关键一步。
有了这种可编程工具用于调节RNA 哺乳动物细胞中,学习如何创造新的机遇细胞的功能,以及可能用于设计更安全的治疗方法。与编辑细胞基因组永久性变化的DNA不同,靶向RNA可以使研究人员进行临时改变,改变基因产生的蛋白质量,而不是完全停止生产。
“即使我们有很好的工具来删除基因,它们仍然有很多局限性,使基因功能的研究变得困难,”共同第一作者Omar Abudayyeh解释说,他是Broad核心成员和麻省理工学院副教授的研究生。冯章 “Cas13允许你降低基因表达水平而不完全消除它们,这对于研究基因很有用,并且可能提供一种毒性较小的治疗方法来纠正遗传性疾病。”
由张氏实验室的科学家领导的研究小组测试了来自15种不同微生物的Cas13酶,从Leptotrichia wadei(LwaCas13a)中找到了最适合这项任务的微生物。使用LwaCas13a使他们能够切割靶RNA中的特定位点,其特异性高于目前的RNA敲除工具选择RNA干扰(RNAi)。尽管RNAi可能是一种有用的工具,但它往往会导致不必要的脱靶效应,使实验难以解释。Cas13显着降低了这种脱靶效应。
Zhang的研究小组还证明,Cas13结合RNA但不切割它的所谓“死亡”变体可以与明亮的荧光“标签”结合,在视觉上跟踪目标RNA,因为它在细胞内移动。
“我们在这里设计的Cas13工程用于绑定和成像转录本,显示了该平台对开发更广泛的监测和操作RNA工具的承诺,”共同第一作者Jonathan Gootenberg补充道,他也是张氏实验室的研究生。以及Broad核心成员Aviv Regev的实验室。
研究人员指出,CRISPR-Cas13天然结合RNA的能力也使其比其他技术更容易使用,目前需要研究人员修改生物体的基因组以创建结合位点。这些特征可以使CRISPR-Cas13成为生物学家研究基因功能的工具箱的重要补充; 研究人员可以通过非营利性质粒库Addgene获得CRISPR-Cas13工具。
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