在工作中看蛋白质

成像单个荧光标记的大分子可以揭示其他实验根本不能的活动细节。然而，在生理浓度下，背景荧光经常压倒来自单个分子的信号。

来自哈佛大学的科学家团队，包括沙特阿拉伯国王阿卜杜拉科技大学(KAUST)的Satoshi Habuchi，开发了一种新技术PhADE(光活化，扩散和激发)，克服了背景荧光问题。

感兴趣的蛋白质用一种荧光蛋白标记，当被特定波长的光脉冲击中时，该荧光蛋白可以改变其发射特性。然后将蛋白质加入已固定在微流体流动池中的结合底物上。在表面附近的一部分荧光蛋白光活化后，快速扩散消除了任何可能引起背景荧光的未结合蛋白，仅留下与底物形成键的分子。然后可以在荧光激发下观察这些单独的分子相互作用。

研究人员使用PhADE来研究DNA复制的动力学。对Fen1的单个分子进行成像，这是一种参与将DNA片段连接在一起的酶，与固定的DNA相互作用，它们能够测量复制进行的速率，复制起始的频率和Fen1的半衰期。

作者强调PhADE的广泛潜在应用，因为它可以设想用于检测具有多种可能的荧光团的任何蛋白质。“我们希望PhADE将成为研究复杂生化反应动力学的一种广泛使用的方法，特别是在蛋白质 - 蛋白质或蛋白质 - 核酸相互作用较弱但无法用常规单分子工具成像的情况下，”约翰内斯沃尔特说，他是该研究的资深作者之一。

郑重声明：本文版权归原作者所有，转载文章仅为传播更多信息之目的，如有侵权行为，请第一时间联系我们修改或删除，多谢。