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更好的抗体验证方法应改善关键研究

2019-11-13 10:07:32 • 来源：

蒙特利尔神经病学研究所和医院(神经病学)的彼得·麦克弗森(Peter McPherson，PhD)领导的研究小组在eLife中发表了一项研究(“ 抗体表征程序的实施及其对主要ALS / FTD疾病基因C9ORF72的应用 ”)，该研究指出了需要更好的抗体验证，并概述了其他实验室可以用来确保与它们一起工作的抗体正常运行的过程。

更好的抗体验证方法应改善关键研究

抗体在实验室和诊所中用于研究蛋白质，蛋白质是将生物体基因信息转化为组织，器官的结构，功能和调控的生物分子。基因突变会导致蛋白质失衡或功能失调，从而导致人类疾病。

抗体使科学家可以通过鉴定蛋白质在细胞中的位置和数量来研究蛋白质。由于它们的重要性，许多公司将抗体作为商业产品进行生产，他们将其出售用于科学研究和用于临床环境。

然而，先前的研究表明，许多可商购获得的抗体不能特异性鉴定它们应该检测的蛋白质。这就对使用这些抗体的研究提出了质疑，并强调需要一种准确，标准的过程来测试抗体的质量。

Neuro研究人员决定使用人类蛋白质作为测试案例，以突出抗体验证问题并演示其他实验室可以用来验证其抗体的程序。他们专注于基因C9ORF72的蛋白质产物，该基因突变是肌萎缩性侧索硬化症(ALS)和额颞痴呆的主要遗传原因。

抗体是生物医学研究的重要资源，但尚无社区公认的标准来严格表征其质量。在这里，我们开发了一种程序来验证预先存在的抗体。通过蛋白质组学数据库确定的具有高表达靶标的人类细胞系，用CRISPR / Cas9修饰以敲除(KO)相应基因。购买针对靶标的商业抗体，并通过免疫印迹比较亲本和KO进行测试。研究人员写道，经过验证的抗体可用于最终鉴定表达水平最高的细胞系，如果需要，可产生新的KO，然后通过免疫沉淀和免疫荧光筛选细胞系。

选定的抗体用于更深入的操作，例如免疫组织化学。该管道易于实现且可扩展。应用于主要ALS疾病基因C9ORF72的高质量抗体揭示了C9ORF72定位于吞噬体/溶酶体。无法识别C9ORF72的抗体已被广泛引用在论文中，引起了人们对先前报道的C9ORF72特性的关注。”

在测试了公司宣传的针对C9ORF72的16种抗体后，研究小组发现16种抗体中只有一种能够在免疫荧光中准确检测到C9ORF72，这种技术可以使抗体对蛋白质染色，从而可以在显微镜下看到它们。其他技术仅用另外两种抗体就成功了。通过验证标准的抗体尚未在科学研究中使用。未能通过验证标准的抗体已在多项研究中使用。

该结果使以前的研究受到质疑，这些研究使用抗体来检测C9ORF72，这些C9ORF72要么根本不识别蛋白质，要么识别其他无关蛋白质。而且，他们强调需要更好的抗体验证。

科学面临可再现性的危机。研究结果通常是无法复制的。在细胞生物学中，缺乏有效的抗体导致了该问题。研究人员在其eLife论文中描述了他们的验证方法，其他实验室可以复制该验证方法以确保其抗体正常工作。

麦克弗森说：“在研究C9ORF72论文时，它变得与一个基因无关，而与其他实验室可用于验证抗体的模板有关。” “我们使用的程序并不是革命性的，实际上，这使我们的方法广泛适用于本领域的任何实验室，但据我所知，这是描述简化抗体验证过程的第一批论文之一。可重复性危机的很大一部分是由于抗体验证不力。我们欠资金提供者和患者做得更好。”

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