检测项目名称：25-羟基维生素D2/D3检测

一、检测平台介绍（检测方法、采样步骤、检测试剂、检测仪器）

1、检测方法：串联质谱技术

VitD(VitaminD)，主要由皮肤经紫外线照射合成，具有调节钙磷代谢，防治

儿童佝偻病、骨质疏松的重大作用。近年来发现充足的VitD对于心血管、糖尿病、肿瘤、

免疫性疾病起到预防作用。传统研究认为，VitD参与调节体内钙、磷代谢，维持骨骼健康。

近年来的研究发现，VitD的作用远不止维系骨骼健康那么简单，它具有极广泛的生理功能，

VitD受体存在于身体的大部分组织中，在许多常见病的发生发展中，都可见到VitD的影

子，肿瘤、糖尿病、高血压、心血管疾病和自身免疫性疾病等多种疾病都与VitD缺乏相关。

VitD(VitaminD)是一种脂溶性维生素，根据来源不同可以分为2大类：

▪VitD2(麦角钙化醇)，主要来源于植物性食物，自身无法合成。

▪VitD3(胆钙化醇)，主要由皮肤经紫外线照射合成，少量来源于动物性食物。

无论是VitD2还是VitD3都需要经过血液循环转运至肝脏，在肝酶的作用下首先转

化为25-羟基维生素D(25(OH)VitD)，25(OH)VitD再转运到肾脏，经过第二次羟化形

成1,25(OH)2VitD，二者均能发生生物作用。

目前国内外血清25OHD的检测有传统方法如放射免疫、竞争蛋白结合法等,也有高效液

相谱、高效液相谱-串联质谱法等新兴方法。传统技术由于方法特异性及抗基质干扰能

力较差,且有些方法不能同时准确测定25OHD2和25OHD3的含量,因此无法准确反映出血

清25OHD浓度。串联质谱法检测人血清25OHD,能同时准确测定25OHD2和25OHD3的

浓度,且方法特异性好、抗干扰能力强,被公认为是检测人血清25OHD的金标准。

液相串联质谱(LC-MS/MS)：两个或更多的质谱连接在一起，称为串联质谱。最简单的串联

质谱（MS/MS）由两个质谱串联而成，其中第一个质量分析器（MS1）将离子预分离或加

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能量修饰，由第二级质量分析器（MS2）分析结果。最常见的串联质谱为四极杆串联质

谱。第一级和第四极杆分析器分别为MS1和MS2，第二级四极杆分析器所起作用是将

从MS1得到的各个峰进行轰击，实现母离子碎裂后进入MS2再行分析。

MS/MS最基本的功能包括能说明MS1中的母离子和MS2中的子离子间的联系。根据

MS1和MS2的扫描模式，如子离子扫描、母离子扫描和中性碎片丢失扫描，可以查明不同

质量数离子间的关系。

MS/MS在混合物分析中有很多优势。在质谱与气相谱或液相谱联用时，即使谱

未能将物质完全分离，也可以进行鉴定。MS/MS可从样品中选择母离子进行分析，而不受

其他物质干扰。

液相串联质谱(LC-MS/MS)主要用于分析GC-MS/MS不能分析，或热稳定性差，强极

性和高分子量的物质，如生物样品（药物与其代谢产物）和生物大分子（肽、蛋白、核酸和

多糖）。

液相串联质谱（LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry）被称为“分

子天平”，它的出现标志了质谱技术在临床检验医学工作成功普及的开始，质谱技术已经逐

步发展成为应用广泛的分析手段，具有超敏性、高特异性、高选择性和快速检测的优点。

2、样本送检流程

医生开检验申请单→护士或检验采样，并登记采样者、采样日期、采样时间等信息→护

士或检验将样本、检验申请单、交接单交予艾迪康公司物流→当地艾迪康公司物流将样

本样本、检验申请单、交接单运送至上海艾迪康临床检验中心

3、样本采集及要求

①静脉采血3ml，推荐首选普通血清管分离血清、也可使用EDTA抗凝管（紫盖）分离血

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浆;

②采血后6小时内采用离心沉淀法（1300g,10min）分离血清，如果不能立即检测须将血清

样本置于2-8度或-20度避光保存;

③样本运输上海途中需要4度蓝冰运输;

④患者在进行钙和维生素D补充前，必须提前进行该项检测，服药期间，每1-3月复查一次;

4、流动相及萃取试剂：进口（Sigma/Fluka）试剂，实验室根据SOP自配

检测试剂盒：(上海复星)25羟基维生素D2+D3检测试剂盒

5、检测仪器：

①LC-MS/MSAPI3000②WATERS

二、实验室的质量控制

25羟基维生素D2+D3项目作为艾迪康近期新开展的项目。实验室依据ISO15189相关

体系文件配合参考《化学药物临床药代动力学研究技术指导原则》建立内部质量控制文件，

从2014年开始，我们选取美国病理学家协会（CollegeofAmericanPathologists，CAP）

的能力验证活动ProficiencyTesting,PT也称为室间质评）进行质量控制，在内部，严格按

照SOP针对每次检测加入3个值（高、中、低）的内部质控以及一个实验室盲孔数据进行

监测。

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