·３９９·

第１９卷第５期

２００６年５月

医学研究生学报

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓ

Ｖｏｌ．　１９　Ｎｏ．　５

Ｍａｙ．　２００６

·论著·

新生儿脐带血Ｔ细胞亚的流式细胞仪检测

刘清泉，，黄长形‘，樊春澎，李怡，

（Ｉ．第四军医大学唐都医院解放军感染病诊疗中心，陕西西安７１００３８；　２．第四军医大学西京医院

临床免疫科，陕西西安７１００３２；　３．第四军医大学唐都医院妇产科，陕西西安７１００３８）

摘要：目的：检测我国新生儿脐带血Ｔ细胞亚的变化。方法：使用全自动血液进行血常规检测；荧光

素标记的抗ＣＤ４／抗ＣＤ８／抗ＣＤ３和抗ＣＤ４／抗ＣＤ２５／抗ＣＤ３单克隆抗体对血液细胞表面分子进行免疫荧光染，

用流式细胞术进行各细胞亚计数和分析。结果：新生儿脐带血中红细胞（ＲＢＣ）计数、血红蛋白（Ｈｂ）含量、白

细胞（ＷＢＣ　）计数、淋巴细胞百分比与外周血有显著性差异。新生儿脐带血组中ＣＤ３　｀　Ｔ细胞、ＣＤ３＇　ＣＤ４＇　Ｔ细

胞、ＣＤ３＇　ＣＤ８十Ｔ细胞、ＣＤ４＇　ＣＤ８＇　Ｔ细胞、ＣＤ４十ＣＤ２５　ｈｉｇｈ调节性Ｔ细胞、ＣＤ４＇　ＣＤ２５＇＂＇　Ｔ细胞、ＣＤ４＇　ＣＤ２５一Ｔ细胞绝

对计数及其在各自细胞亚中的百分比均存在显著性差异。结论：中国正常新生儿脐带血与外周血的

ＲＢＣ，Ｈｂ，ＷＢＣ及Ｔ细胞亚检测结果存在显著性差异，这与新生儿免疫机制发育不完全是相符合的。

关键词：Ｔ细胞亚；新生儿脐带血；外周血；流式细胞术

中图分类号：８３３１．１文献标识码：Ａ文章编号：１００８－８１９９（２００６）０５－０３９９－０３

Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ

ＬＩ　　　　　　　　　　　　　　Ｕ　Ｑｉｎｇ－ｑｕａｎ＇，ＨＵＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｘｉｎｇ＇，ＦＡＮ　Ｃｈｕｎ－ｍｅｉｚ，ＬＩ　Ｙｉ３

（１．　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　ｏｆ　ＰＬＡ，Ｔａｎｇｄｕ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉ－

ｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｘｉ’ａｎ　７１００３８，Ｓｈａｎｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ；２．　Ｘ乒ｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，

Ｘｉ’ａｎ　７１００３２，Ｓｈａｎｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ；３．　Ｔａｎｇｄｕ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｘｉ’ａｎ

７１００３８　，　Ｓｈａｎｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔ

ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．　　　Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｕｌｌ　ｂｌｏｏｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｃｏｕｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｂｌｏｏｄ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｅｘａｍｉｎａ－

ｔｉｏｎ．　Ｓｔａｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｌａｂｅｌｅｄ　ａｎｔｉ－ＣＤ４／　ａｎｔｉ－ＣＤ２５／　ａｎｔｉ－ＣＤ３　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ＣＤ４／　ａｎｔｉ－

ＣＤ８／　ａｎｔｉ－ＣＤ３　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ．　Ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｕｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｒｅｅ－ｃｏｌｏｒ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

ｂｙ　ｌｆｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｙｒ．　　Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ　，ｌｅｕｃｏｃｙｔｅｓ，ｈａｅｍａｔｏｇｌｏｂｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ　ｌｙｍｐｈｏｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ｉｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ　ｗｅｒｅ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．

Ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ３＋Ｔ　ｃｅｌｌｓ、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ　ｃｅｌｌｓ、ＣＤ３十ＣＤ８＋Ｔ　ｃｅｌｌｓ、ＣＤ４＋

ＣＤ８＋Ｔ　ｃｅｌｌｓ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＂＂　ｒｅｇｕｌａｔｏｙ　ｒＴｃ　ｅｌｌｓ、ＣＤ４‘ＣＤ２５＇０｀　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ＣＤ４＋ＣＤ２５一Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ

ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．　　　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｆｕｌｌ　ｂｌｏｏｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｃｏｕｎｔｓ

ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｃｏｒｄ　ｗｅｒｅ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．　Ｔｈｉｓ

收稿日期：２００６－０１－２４；修订日期：２００６－０２－２７

基金项目：教育部归国人员启动基金资助项目（批准号：２００２－ＨＧＯ０３）；第四军医大学人才基金资助项目（２００３年度）；第四军医大

作者简介

通讯作者

学唐都医院苗子人才基金资助项目（２００１年度）　　

主治医师，医学硕士研究生，从事传染病专业。

刘清泉（１９７６－），男，山东滕州人

，

副教授，副主任医师，医学博士，硕士生导师，从事传染病专业。

黄长形（１９６５一），男，安徽望江人

，

·４００·医学研究生学报

２００６年５月第１９卷

ｒｅｓｕｌｔ　ｉｓ　ｐｒｏｂａｂｌｙ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｔａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｅｏｎａｔｅｓ．

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ；Ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ；Ａｄｕｌｔ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ；Ｆｌｏｗ

ｃｙｔ　　　　　　　　　　　　　　　　ｏｍｅｔｙｒ

０引言

ＰＥ一抗ＣＤ２５　ｍＡｂ和ＰｅｒＣＰ一抗ＣＤ３　ｍＡｂ组合（各２０

特异性免疫功能低下是乙型病毒性肝炎慢性化　　　　

的关键［’，’〕。妊娠期、儿童期催患感染乙型病毒性

闪）染，另设１管为ＦＩＴＣ一抗ＣＤ４　ｍＡｂ，ＰＥ一抗ＫＬＨ

ｍＡｂ同型对照和ＰｅｒＣＰ一抗ＣＤ３　ｍＡｂ（各２０　ｊ，１）。加　

１００闪抗凝血室温避光孵育１５　ｍｉｎ。加红细胞裂解

肝炎其慢性化机率明显高于成年感染者〔’川，这与

新生儿及儿童免疫系统发育程度低于有关。我

们用流式细胞仪对外周血和新生儿脐带血Ｔ

细胞亚进行了检测分析，希望能对新生儿的免疫

状态有一个比较全面地了解。

１材料和方法

１．１研究对象新生儿脐带血来自本院妇产科

２００５年４－６月收治的足月自然分娩健康新生儿１１

例（男婴５例，女婴６例），结扎剪断脐带后脐静脉

采血。外周血采自我院健康工作人员１１例

（男６例，女５例，年龄２３一３５岁）。３０　ｍｉｎ内血细

胞计数，２ｈ内流式细胞术检测。

１．２仪器和试剂Ｓｙｓｍｅｘ　ＸＥ　－　２　１００全自动血液

及试剂购自日本Ｓｙｓｍｅｘ（希森美康）株式会

社。以下仪器和试剂购自Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司：流

式细胞仪（ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ）　，５　ｍｌ　ＥＤＴＡ－Ｋ，抗凝管、绝

对计数ＴｒｕＣＯＵＮＴ管、ＲＢＣ裂解液、ＦＩＴＣ／ＰＥ／ＰｅｒＣＰ

标记抗ＣＤ４／抗ＣＤ８／抗ＣＤ３　ｍＡｂ免洗ＴｒｉＴＥＳＴ试

剂（ＳＫ３，ＳＫＩ　，ＳＫ７克隆）、ＦＩＴＣ一抗ＣＤ４　ｍＡｂ（鼠

ＩｇＧＩ　，　ＳＫ３克隆），ＰＥ一抗ＣＤ２５　ｍＡｂ（鼠ＩｇＧｌ，２Ａ３克

隆）、ＰｅｒＣＰ一抗ＣＤ３　ｍＡｂ（鼠ＩｇＧ１，ＳＫ７克隆）及相应

鼠抗钥孔戚血蓝素（ＫＬＨ）　ｍＡｂ同型对照（Ｍｏｕｓｅ

似；ｘ４０克隆）。自行配制洗涤液和固定液：洗涤液

（ＮａＣｌ　８．　０　ｇ，ＫＣｌ　０．　２　ｇ，　Ｎａｔ　ＨＰ０４　１．１５ｇ，ＫＨｚ　Ｐ０４

０．　２　９，　ＮａＮ３　１．　０　ｇ，　Ｈ２　０　１０００　ｍｌ）　，　０．　４５　ｔＬ，ｍ滤膜过滤

除菌；固定液（ＮａＣｌ　８．　０　ｇ，　ＫＣｌ　０．　２　ｇ，　Ｎａｔ　ＨＰＯ，　１．　１５

ｇ，　ＫＨ２Ｐ０４　０．　２　ｇ，多聚甲醛１０　ｇ，　Ｈ２０　１０００　ｍｌ）　，　０．　２２

｝ｔ，ｍ滤膜过滤除菌。

１．３血细胞计数使用Ｓｙｓｍｅｘ　ＸＥ　－　２１００全自动

血细胞仪及试剂进行血细胞分类计数。

１．４　　ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ３绝对计数２０　ｐ，１抗ＣＤ４／抗

ＣＤ８／抗ＣＤ３　ｍＡｂ免洗ＴｒｉＴＥＳＴ试剂加入绝对计数

ＴｒｕＣＯＵＮＴ管中，加５０　ｗ１抗凝血室温避光孵育１５

ｍｉｎ，加红细胞裂解液４５０　ＲＩ孵育１５　ｍｉｎ。流式细胞

仪（ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ）上ＭｕｌｔｉＳＥＴ软件分析。

１．５　　ＣＤ４／ＣＤ２５／ＣＤ３染用ＦＩＴＣ一抗ＣＤ４　ｍＡｂ，

液２　ｍｌ孵育１０　ｍｉｎ，　３００　ｘ　ｇ离心５　ｍｉｎ，弃上清。２　ｍｌ

洗涤液洗涤１次，０．　５　ｍｌ固定液固定并悬浮细胞。

流式细胞仪（ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ）上Ｃｅｌｌ　Ｑｕｅｓｔ软件分析。

１．６统计学方法ＳＰＳＳ　１１．　５统计软件进行描述

性统计分析，组间行ｔ检验。

２结果

２．１血细胞分类计数脐带血中红细胞、白细胞、

粒细胞、淋巴细胞、单核细胞绝对计数和血红蛋白含

量显著高于外周血；血小板计数和单核细胞百

分比在两组间无显著性差异；淋巴细胞百分比高于

外周血，粒细胞百分比低于外周血，见

表１。

表１脐带血与外周血血细胞分类计数比较（ｘ　１Ｓ）

Ｔａｂｌｅ　１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ａｕｔｏｍａｔｉｚｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ

ｂｌ　　　　　　　　ｏｏｄ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ（　ｘ　１　ｓ　）

血细胞分类

外周血脐带血

红细胞（ｘ　１０１２　／Ｌ）４．４６７　１０．３０５

５．　１０２　１０．４５２　＊

血红蛋白（留Ｌ）１４０．２１８．９

１５５．４士６．８－　　

血小板（ｘ　１０’２／Ｌ）０．２３３　１０．０５９

０．２５６士０．６３

白细胞（ｘ　１０９／Ｌ）５．８２９　１１．３０６

１３．８６４士３．　８６１　＊　＊

粒细胞

（％）　　　　５９．１　１４．２５３．　８　１　１５．７　＊

（ｘ　　　　　１０９／Ｌ）３．５２５　１０．８９０

７．３５４士３．　３６１　＊．

淋巴细胞

（％）　　　　３３．９士３．７

３８．５土１１．１＊

（ｘ　　　　　１０９／Ｌ）１．９３２士０．３８６

５．２６８　１　１．　８５５　＊＊　

单核细胞

（％）　　　　６．５１０．５　　６．３士２．９　　

（ｘ　　　　　１０９／Ｌ）０．３５６士０．０９６

０．９０１士０．　６９４　＊＊　

与外周血比，＊Ｐ＜０．０５，＊＊　Ｐ　＜０．　０１

２．２　　Ｔ细胞亚分析脐带血ＣＤ３　＋　Ｔ细胞计数明

显高于外周血；ＣＤ３　＋　ＣＤ４十Ｔ细胞计数及其占

ＣＤ３十Ｔ细胞比率明显高于外周血；ＣＤ３＇　ＣＤ８十

Ｔ细胞计数明显高于外周血，但其占ＣＤ３　＋　Ｔ细

胞比率低于外周血；ＣＤ４　＋　ＣＤ８十Ｔ细胞计数明

显高于外周血，而其占ＣＤ３十Ｔ细胞比率与

外周血无显著性差异；；ＣＤ４＇／ＣＤ８＋比值明显高于成

第５期刘清泉，等新生儿脐带血Ｔ细胞亚的流式细胞仪检测４０１

人外周血，见表２ａ

对脐带血ＣＤ３　　　　　＋　ＣＤ４十Ｔ细胞表面ＣＤ２５分子进

行流式细胞术分析时，依据ＣＤ２５表达强度可将

ＣＤ３＇　ＣＤ４＇　Ｔ细胞分为三：ＣＤ４．　ＣＤ２５一Ｔ细胞、

ＣＤ４＇　ＣＤ２５＇＂｀　Ｔ细胞和ＣＤ４＇　ＣＤ２５ｈ，９ｈ调节性Ｔ细胞。

对外周血ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ细胞进行流式细胞术分

析时，则需以荧光强度１０’作为阴性界限，将荧光强

度＞１０２定为ＣＤ２５　ｈ，＂表达的标准［５，６］。脐带血

ＣＤ４＋ＣＤ２５－Ｔ细胞计数及其占ＣＤ３　＋　ＣＤ４　＋　Ｔ细胞

比率明显高于外周血；ＣＤ４　＋　ＣＤ２５＇＂｀　Ｔ细胞计数

及其占ＣＤ３十ＣＤ４十Ｔ细胞比率明显低于外周

血；ＣＤ４＋　ＣＤ２５ｈ；Ｋｈ调节性Ｔ细胞计数及其占

ＣＤ３十ＣＤ４＋Ｔ细胞比率明显高于外周血，见

表２０

表２　Ｔ淋巴细胞亚的流式细胞仪分析（ｘ　１Ｓ）

Ｔａｂｌｅ　２　　ＦＣＭ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ（ｘ士ｓ）

Ｔ细胞亚外周血脐带血

ＣＤ３　＋Ｔ细胞绝对计数（个／国）１１７５．以１４１７．３０３０５７．９０１５０７．３１

ＣＤ３　＋ＣＤ４　＋Ｔ细胞绝对计数（个／ＲＩ）６５０．　７３　１　１４７．３２２１３１．１９　１３６５．　８６＊

ＣＤ３　＋　ＣＤ４　＋Ｔ细脚ＣＤ３　＋Ｔ细胞（任）５　　７．１０　－６．１９

６９．　　脸１５．２１，

ＣＤ３　＋ＣＤ８十Ｔ细胞绝对计数（个／ｗ１）４０９．５５　１　１０１．９３８６０．４５　１２２７．０５

ＣＤ３　＋　ＣＤ８　＋Ｔ细脚ＣＤ３　＋Ｔ细胞（％）３６．１　　０＝５．４３

２７．　　９１　１５．４７

ＣＤ４十ＣＤ８十Ｔ细胞绝对计数（个／０）１１　　．如１５．０７３１　　．码－１３．　８５，

ＣＤ４＇　ＣＤ８十Ｔ细胞／ＣＤ３　＋Ｔ细胞（ｑｃ　）】　　．１０１０．５７！　　．１８１０．４０

ＣＤ　＇ＣＤ２５一Ｔ细胞绝对计数（个／ｗ１）４０９．７３　－１０５．４１１８１５．砚１３５６．４６　＊

ＣＤ十ＣＤ２５一Ｔ细脚ＣＤ４＋　Ｔ细胞（％）６　　２．７５　１６．８８８　　５阅１３．８５

ＣＤ４＇　ＣＤ２５＇＂　Ｔ细胞绝对计数（个／闪）２３３．３６　１６８．８２９　　３．４５１５１．９０

ＣＤ４十ＣＤ２５　＂＂Ｔ细胞／ＣＤ４＋　Ｔ细胞（“）３　　６．０８士７．０２４．　　４９　１２．４８

ＣＤ４　＇　ＣＤ２５　ｈ＇９＇　Ｔ细胞绝对计数（个／ｗ１）９．　　０９士３．０５２２１．８２＋６７．伪率

ＣＤ４＇　ＣＤ２５　ｈ＇ｇ＂　Ｔ细脚ＣＤ４十Ｔ细胞（％）１．　　４０１０．３７

１０．５０１２．８０

ＣＤ４＋／（；ＤＳ十１．　　６１－０．２９２．６｛１０．７１

与外周血比，＊Ｐ＜０．０１

３讨论

　　　　本试验是为进一步研究不同年龄乙型肝炎病毒

感染与慢性化发生率及慢性化与患者免疫状态间相

互关系（结果尚未发表）而作的基础性实验。试验

目的在于确定健康新生儿脐带血及正常外周血

中白细胞及Ｔ细胞亚的实际情况，为进一步评估

不同年龄乙型肝炎病毒感染者及不同肝炎状态患者

免疫状态做好准备。

　　　　血细胞分类计数发现，新生儿脐带血中血小板

计数与外周血比较无显著性差异；新生儿脐带

血中红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数均明显

高于正常外周血；虽然脐带血中粒细胞绝对计

数明显高于正常外周血，但其百分含量则相反，

说明脐带血中含有更多的淋巴细胞。

进一步分析脐带血Ｔ细胞亚发现，　　　　脐带血中

ＣＤ３＇　Ｔ细胞的数量明显高于外周血，这与脐带

血中白细胞、淋巴细胞含量高于外周血有关。

ＣＤ３十ＣＤ４＋细胞为辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ），包括ＴｈＯ，

Ｔｈｌ和Ｔｈ２亚ｔ７ｉ，脐带血中其计数及占ＣＤ４＇　Ｔ细

胞比率明显高于外周血。ＣＤ３十ＣＤ８十Ｔ细胞为

细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ或Ｔｃ　），包括Ｔｃｌ和Ｔｃ２

亚，虽然脐带血中其计数明显高于外周血，但

其占ＣＤ３＇　Ｔ细胞比率却低于外周血。

ＣＤ４＇ＣＤ８＋细胞为不成熟Ｔ淋巴细胞，脐带血中其

计数明显高于外周血，而其占ＣＤ３　＇　Ｔ细胞比率

与外周血无显著差异。脐带血ＣＤ４＇／ＣＤ８＋比

值明显高于外周血。

ＣＤ４＇　　　　　ＣＤ２５十调节性Ｔ细胞是细胞介导的免疫

抑制中的关键性细胞「８－１１１。外周血中，３５％的

ＣＤ４＇Ｔ细胞表达ＣＤ２５，但其中大部分表达中低水

平的ＣＤ２５，只有１％一３％表达高水平的ＣＤ２５ｔ５＇　ｏ

体外实验证明，只有ＣＤ２５　ｈｉｇｈ的ＣＤ４十Ｔ细胞具有免

疫抑制作用［１２１，表达ＣＤ２５＇＂｀的ＣＤ４　＇Ｔ细胞与活化

的记忆性Ｔ细胞更相似。这种持续的ＣＤ２５表达使

得在分离人高纯度ＣＤ４＇　ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞和进

一步评价该细胞抑制活性时更加困难。虽然与

ＣＤ４　｀　ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞相关的细胞标记分子很

多，如糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相

关受体（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ＴＮＦＲ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ，

ＧＩＴＲ）、　Ｔｏｌｌ样受体－４　（　ｔｏｌ－ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ－４，　ＴＬＲ４　）、细

胞毒性Ｔ淋巴细胞抗原４　（　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓ－

ｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ－４，　ＣＴＬＡ－４）　，　ＣＤ１０３等，但目前尚无

一种能很好地区分ＣＤ４＇　ＣＤ２５ｈ；ｇｈ的调节性Ｔ细

胞困。所以，目前比较通用的使用流式细胞仪确定

成年人外周血ＣＤ４＇　Ｔ细胞中ＣＤ２５　ｈｉｇｈ表达的标准

是以荧光强度１０’为阴性标准，荧光强度＞１扩定为

ＣＤ２５　ｈｉｇｈ表达［５，６］。而在脐带血ＣＤ４＇　Ｔ细胞中，

Ｃ　Ｄ２５　ｉｎ，与ＣＤ２５ｈ，ｇｈ表达在流式细胞仪散点图和柱形

图中能很好地区分。

试验中我们发现，　　　　脐带血ＣＤ４十Ｔ细胞约８５％

为ＣＤ４＇　ＣＤ２５一Ｔ细胞，约４％为ＣＤ４｀　ＣＤ２５＇＂｀Ｔ细

胞，约１０％为ＣＤ４十ＣＤ２５　ｈｉｇｈ调节性Ｔ细胞，与

外周血６２％　，３６％和１％一２％比例明显不同。考虑

与新生儿接触外界抗原刺激极少，ＣＤ４＇　ＣＤ２５一Ｔ细

胞未被活化为ＣＤ４　｀　ＣＤ２５＇ｎ＇Ｔ细胞及妊娠期间需要

大量ＣＤ４十ＣＤ２５　ｈｉｇｈ调节性Ｔ细胞来抑制胎儿对母

体的免疫反应有关，该比例随着新生儿成长及接触

（下转第４０４页）　　　　　　　　　　　

·４０４·医学研究生学报

２００６年５月第１９卷

排连结损伤往往仅是胫排前韧带的撕裂｛８１。或合并ｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ［Ｊ］．Ｓｕｒｇｉｃａｌ　Ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃ　Ａｎａｔｏｍｙ，２００３，２５（５）：

骨连结的破坏，而皱璧大多保持完好。手术治疗中３７９一８６．

厂

一

一

２﹁

一

一应避免损伤皱璧，造成癖痕愈合，损害下胫胖连结的ＬＪＣｌａｎｔｏｎ　ＴＯ，　Ｐａｕｌ　Ｐ．　Ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｉｎｊｕｒｉｅｓ　ｉｎ　ａｔｈｌｅｔｅｓ［　Ｊ］．　Ｆｏｏｔ　Ａｎ－

ｋｌｅ　Ｃｌｉｎｉｃｓ，　２００２，　７（３）　：５２９－５４９．

弹性。因此，我们认为若选择螺钉内固定，螺钉位置Ｌ

‘

ｓｅ

ｓｅ

︐气

ｓｅ

ｓｅ

ｓｅ

ｓｅ

Ｊｓｅ

ｌ陆震照．躁关节损伤的诊断和治疗［Ｍ］．上海：上海科学技术

应高于跺关节面水平２ｃｍ，以避开皱璧弯窿顶部。文献出版社，１９９８：　７８－８１．

ｌ

ｓｅ螺钉应适当偏前方，从胖骨斜向前上方，与胫排前韧４﹁

ｓｅ

ｓｅ

ｓｅ

ｓｅ

ＬｌＭｉｌｌｅｒ　ＲＳ，　Ｗｅｉｎｈｏｌｄ　ＰＳ，　Ｄａｈｎｅｒｓ　ＬＥ．　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｒｉｃｏｒｔｉｃａｌ

ｓｃｒｅｗ　ｉｆｘａｔｉｏｎ　ｖｅｒｓｕｓ　ａ　ｍｏｄｉｉｆｅｄ　ｓｕｔｕｒｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　ｆｏｒ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｋｌｅ

带纤维走向相平行，钻人胫骨外侧密质，以固定损伤

ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｉｎｊｕｒｙ：　ａ　ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ［　Ｊ］．Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ　Ｔｒａｕ－

较大的下胫排连结前部。ｍａ，　１９９９，１３（１）：３９－４２．

严重的下胫排连结损伤，　　　　骨连结、骨间韧带、胫［５」

Ｖａｎｄｅｒ　ＧＲ，　Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ　ＪＤ，　Ｂｏｎｅ　ＬＢ．　Ｆｒａｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｋｌｅ　ａｎｄ

胖前韧带和胫胖后韧带完全被破坏，下胫胖连结完

ｄｉｓｔａｌ　ｐａｔｒｏ　ｆ　ｔｈｅ　ｔｉｂｉａ［　Ｊ　］　．　Ｉｎｓｔｒ　Ｃｏｕｒｓｅ　Ｌｅｃｔ，　１９９７　，　４６（６）：３１１－

３２１．

全分离。此时，我们建议螺钉的位置应适度上移，或

［６］Ｄｉｔｔｍｅｒ　Ｈ，　Ｄｅｔｔｍａｎｎ　Ｅ．　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｕｐｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｔａｌ　ｔｉｂ－

选择两枚螺钉固定，但最高不应超过躁关节面水平ｉｏｆｉｂｕｌａｒ　ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｗｉｔｈ“Ｅｎｇｅｌｂｒｅｃｈｔｓ　ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｂｏｏｋ＂［Ｊ１．

上５　ｃｍ，，

Ｕｎｆａｌｌｃｈｉｒｕｒｇ，１９９９　，１０２　（１０）　：７７０－７７５．

　　　　通过本研究使我们认识到，下胫膝连结的结构

［７］Ｓｕｓａｎ　ＭＬＣ，　Ｈｏｗａｒｄ　Ｐ，　Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｐ．　Ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｉｎｊｕｒｉｅｓ：　ａｃｕｔｅ，

既牢固又具弹性，下胫排连结损伤的治疗应采取弹

ｃｈｒｏｎｉｃ，　ｎｅｗ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　ｆａｉｌｅｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ仁Ｊ］．Ｆｏｏｔ　Ａｎｋｌｅ

Ｃｌｉｎｉｃ，　２００２　，７　（３）　：５５１－５６５．

性固定。内固定可选择１　－２枚螺钉，距离跺关节面［８１

Ｍｅｈｄｉ　Ｍ．　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　ｔｉｂｉｏｆｉｂｕｌａｒ　ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ

水平２一５　ｃｍ，穿４层骨密质行弹性固定。ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｙｎｄｅｓｍｏｔｉｃ　ｓｃｒｅｗ　ｉｎ　ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ　ｆｒａｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ

ａｎｋｌｅ　ａ　ｃａｄａｖｅｒ　ｓｔｕｄｙ［　Ｊ］．Ｕ　ｒｏｐｅａｎ　Ｊ　Ｔｒａｕｍａ，　２００１　，　６　（２）　：８７一１．

参考文献：

（责任编辑：蔡明虹；英文编辑：唐文杰）

［１」Ｂａｔｒｏｎｉｃｅｋ　Ｊ．　Ａｎａｔｏｍｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｉｂｉｏｆｉｂｕｌａｒ　ｓｙｎｄｅｓｍｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉ－

今．今．带卜今．．令．＂．今，令·今．幸。令．弓）．令．令·今

（上接第４０１页）ｙｒ　Ｔｃ　ｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｍｏｕｓｅ　ｔｏ　ｍａｎ　［　Ｊ　］．Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２００５　，　６２

外源性抗原增加会相应变化。这与有关文献中报道（１），１－１５

的数据相似「５一〕。［７］　　金伯泉卜细胞与分子免疫学ｔＭ］．第２版．北京：科学出版

社，２００１：１３－１５．

参考文献：

［８］　　Ｍａｃｋａｙ　ＩＲ．　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｕｔｕｒｅ；　Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ａｎｄ

ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ　［　Ｊ　］，ＢＭＪ，　２０００，　３２１（７２５３）；９３－９６．

Ｃｈｉｓａｒｉ　ＦＶ．　Ｒｏｕｓ－Ｗｈｉｐｐｌｅ　ａｗａｒｄ　ｌｅｃｔｕｒｅ；　ｖｉｒｕｓｅｓ，　ｉｍｍｕｎｉｔｙ，

［９］　　Ｐａｕｓｔ　Ｓ，　Ｃａｎｔｏｒ　Ｈ．　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅ

ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ；　ｌｅｓｓｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，　２０００，

仁Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｒｅｖ，　２００５，２０４（１）；１９５－２０７．

１５６（４）：１１１８－１１３２．

［１０］

Ｂｅｌｋａｉｄ　Ｙ，　Ｒｏｕｓｅ　ＢＴ．　Ｎａｔｕｒａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ

［２］Ｈｉｌｌｅｍａｎ　ＭＲ．　Ｏｖｅｒｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，　ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ，　ａｎｄ

ｄｉｓｅａｓｅ　［Ｊ］‘Ｎａｔ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２００５，６（４）；３５３－３６０．

ｔｈｅｒａｐｅｕｓｉｓ　ｏｆ　ｖｉｒａｌ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ，　ｗｉｔｈ　ｆｏｃｕｓ　ｏｎ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｐｒａｃｔｉ－

〔１１］Ａｎｔｏｎｙ　ＰＡ，　Ｒｅｓｔｉｆｏ　ＮＰ．　Ｃ　Ｄ４十ＣＤ２５＋Ｔ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃ　ｅｌｌｓ，　ｉｍｍｕ－

ｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ厂Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，　２００１，１９（１５－１６）；１８３７－１８４８．

ｎｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ，　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２［Ｊ］．Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，

一

！傀

︑

门

１Ｇｉｔｌｉｎ　Ｎ．　　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ；　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ

２００５，２８（２）　；１２０－１２８．

［Ｊ］．　Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，１９９７，４３（８　Ｐｔ　２）：１５００－１５０６．

［１２］Ｂａｅｃｈｅｒ－Ａｌｌａｎ　Ｃ，　Ｂｒｏｗｎ　ＪＡ，　Ｆｒｅｅｍａｎ　ＧＪ，　ｅｔ　ａｌ．　ＣＤ４＇　ＣＤ２５ｈｉｇｈ

ｒ

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．

４︐

．

Ｌ

．

ＪＳｈｉｒａｋｉ　Ｋ．　Ｐｅｒｉｎａｔａｌ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒｅ－

ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ仁Ｊ」．Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，

ｖｅｎｔｉｏｎ仁Ｊ］．　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ　Ｈｅｐａｔｏｌ，　２０００　，　１５（Ｓｕｐｐｌ　）：Ｅ１１－

２００１，１６７（３）：１２４５－１２５３．

１５．［１３］

Ｇｒｅｇｇ　Ｒ，　Ｓｍｉｔｈ　Ｃ　Ｍ，　Ｃｌａｒｋ　Ｆ　Ｊ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｅ－

［５］

Ｗｉｎｇ　Ｋ，　Ｅｋｍａｒｋ　Ａ，　Ｋａｒｌｓｓｏｎ　Ｈ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕ－ｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈ＇ｇｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｙｒＴ　ｃ　ｅｌｌｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｗｉｔｈ

ｍａｎ　ＣＤ２５＋ＣＤ４＋Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｙｍｕｓ，　ｃｏｒｄ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔ　ｂｌｏｏｄ

ａｇｅ　［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉ　Ｅｘｐ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２００５，１４０（３）；５４０－５４６

［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　２００２，　１０６（２）　；１９０－１９９．

［６］

Ｗｉｎｇ　Ｋ，　Ｅｋｍａｒｋ　Ａ，　Ｋａｒｌｓｓｏｎ　Ｈ，　ｅｔ　ａｌ．　ＣＤ４＋ＣＤ２５＋－ｒｅｇｕｌａｔｏ－（责任编辑：李风华；英文编辑：唐文杰）