金银花与山银花主要有效成分含量比较要点
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·926· 国际中医中药杂志2016年10月第38卷第10期IntJTradChinMed,October2016,Vol.38,No.10
·论著·
金银花与山银花主要有效成分含量比较
饶伟文黄海燕
【摘要】目的通过测定金银花和山银花主要有效成分含量,比较两者的质量。方法按2015年
版《中华人民共和国药典》金银花和山银花项下收载的含量测定方法,对50批不同产地金银花、山银花
中绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量进行测定。结果金银花木犀草苷含量较
高,绿原酸含量较低,不含或少含皂苷类成分。山银花的主要基源灰毡毛忍冬、红腺忍冬的绿原酸、总
皂苷含量较高,少含或不含木犀草苷。结论金银花与山银花的主要成分含量各有特,部分金银花样
品中皂苷含量较高,用作注射剂原料时,应做皂苷限量检查。
【关键词】金银花;山银花;有效成分;含量测定;质量控制
ComparativeanalysesofthemainactiveingredientsofLoniceraejaponicaeflosand
LoniceraeflosRaoWeiwen,InstitutesforFoodandDrugControl,Guilin541001,
China
Correspondingauthor:RaoWeiwen,Email:glyjs_raoww@
【Abstract】ObjectiveTocomparethequalityofLoniceraeflosandLoniceraejaponicaeflosby
sAccordingtomethodsandstandardsofdeterminationin
ChinesePharmacopoeia(2015Edition),thecontentofchlorogenicacid,galuteolin,macranthoidinBand
raeflosweredetermined.
ResultsForLoniceraejaponicaeflos(LonicerajaponicaThunb.),thecontentsofgaluteolinwashigher,and
chlorogenicacidwaslower,mainspeciesofLoniceraeflos(Lonicera
macranthoidesHand.-icerahypoglaucaMiq.),thecontentsofchlorogenicacidandthesumof
saponinswerehigher,siThemainactiveingredientsofLoniceraejaponicae
tentsofsaponinsinsomesamplesofLoniceraejaponicaeflos
werehigher,sothetestofsaponinshouldbecideredwhenitsrawmaterialforinjection.
【Keywords】Flosloniceraejaponicae;Floslonicerae;Mainactiveingredients;Determination;Quality
control
金银花是传统常用中药,来源于忍冬科植物
忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初
开的花。1977-2000年前后5版《中华人民共和
国药典》(以下简称《中国药典》)收载的金银花,
其来源包括忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica
Thunb.、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.、山银
花LoniceraconfusaDC.和毛花柱忍冬Lonicera
dasystylaRhed.。2005年版《中国药典》将其分列
DOI:10.3760/.1673-4246.2016.10.017
作者单位:541002广西壮族自治区桂林食品药品检验所
通信作者:饶伟文,Email:glyjs_raoww@
为金银花和山银花2个品种,金银花的来源为忍
冬,山银花的来源为忍冬科灰毡毛忍冬Lonicera
macranthoidesHand.-Mazz.、红腺忍冬Lonicera
hypoglaucaMiq.、华南忍冬LoniceraconfusaDC.
和黄褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsuet
。但两者性味归经、功效、主治、用法
用量相似1,临床应用较为混乱。[]
目前,有关金银花与山银花所含主要成分的
含量比较研究已有报道,但对两者化学成分系统
对比分析的数据尚不多2-4。为进一步比较金银花[]
和山银花的质量,本研究按照2015年版《中国药
万方数据
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典》金银花、山银花项下收载的含量测定方法,
对50批不同产地金银花、山银花中绿原酸、木犀
草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量进
行对比,为指导其临床合理应用提供参考。
1仪器与试药
1.1试验仪器
Waters2695/2998/2487液相谱仪(美国
Waters公司);Alltech3300ELSD检测器(美国奥
泰公司);KQ-600E型超声仪(昆山市超声仪器有
限公司);SIGMA3-30K高速台式冷冻离心机
(SIGMA-ALDRICH);LabTechEV311旋转蒸发
仪(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)。
1.2试验试剂
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品(批号111814-
201303,含量92.8%)、川续断皂苷乙对照品(批号
111813-201202,含量93.4%)木犀草苷对照品(批
号111720-201307,含量99.3%)、绿原酸对照品(批
号110753-201314,含量96.6%)均购于中国食品药
品检定研究院;乙腈、甲酸、冰醋酸为谱纯,
其余试剂均为分析纯,水为高纯水。
1.3样品
金银花19批、山银花31批(包括灰毡毛忍冬
12批、红腺忍冬15批、黄褐毛忍冬3批和华南忍
冬1批),均系本所采集或收集,并由饶伟文主任
药师鉴定金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera
japonicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花;山银花
为同属植物灰毡毛忍冬Loniceramacranthoides
Hand.-Mazz.、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.、
黄褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsuet
和华南忍冬LoniceraconfusaDC.的干
燥花蕾或带初开的花。
2方法与结果
2.1木犀草苷的含量测定
2.1.1谱条件:按2015年版《中国药典》金银
万方数据
花项下木犀草苷含量测定方法[1]进行。谱柱为
AgilentZORBAXSB-pheny(4.6mm×250mm,
5μm);流动相为乙腈(A)-0.5%冰乙酸(B),梯度
洗脱,洗脱程序见表1;流速为1.0ml/min;检测
波长为350nm。理论塔板数按木犀草苷峰计算不
低于20000,与其他谱峰分离度大于1.5。谱
图见图1。
表1流动相梯度洗脱表(%)
时间乙腈0.1%乙酸
0~15min10~2090~80
15~30min2080
30~40min20~3080~70
A
1
010203040
B
1
010203040
t/min
注A:木犀草苷对照品溶液;B:供试品溶液;1:木犀草苷
图1木犀草苷的HPLC图
2.1.2溶液配制:①对照品溶液的配制:精密称
取木犀草苷对照品10.21mg,置于50ml容量瓶
中,用70%乙醇溶解并稀释至刻度,得对照品母
液(202.77μg/ml),再取2ml至10ml容量瓶中,
用70%乙醇溶解并稀释至刻度,制成40.55μg/ml
的对照品溶液。②供试品溶液的配制:取金银花
或山银花细粉(过4号筛)约2.00g,精密称定,置
具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,称定重
量,超声处理(功率250W,频率35kHz)1h,放
冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,
摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,回收溶剂至
干,残渣用70%乙醇溶解并转移至5ml量瓶中,
加70%乙醇至刻度,即得。
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2.1.3线性关系考察:分别吸取1、2、3、5、10ml
的202.77μg/ml木犀草苷对照品溶液置于10ml
容量瓶中,以70%乙醇定容至刻度,得到浓度分
别为20.28、40.55、60.83、101.39、202.77μg/ml
的木犀草苷对照品溶液。精密吸取对照品溶液10μl,
分别注入液相谱仪中,按上述谱条件测定峰
面积。以测得峰面积为纵坐标(A),对照品进样量
为横坐标(C)绘制标准曲线,得木犀草苷回归方
程:A=1.8874C+105.77,R=0.9995,表明木犀
草苷进样浓度在20.28~202.77μg/ml范围内与峰
面积呈良好线性关系。
2.1.4精密度考察:取木犀草苷对照品溶液
(40.55μg/ml)连续进样5次,结果木犀草苷峰面积
的RSD=0.24%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.1.5稳定性试验:取供试品溶液1份,分别于0、
2、6、12、24h测定,
记录峰面积,计算RSD=0.33%
(n=5),表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.1.6重复性试验:取同一批金银花样品粉末6份,
按上述方法测定,计算木犀草苷平均含量为0.052%,
RSD=1.28%(n=6),表明本方法重复性良好。
2.1.7加样回收率试验:在已测定木犀草苷含量
的金银花样品中定量加入木犀草苷对照品,测定
9次,平均回收率为103.10%,RSD=2.27%。
2.1.8样品测定结果:精密吸取对照品溶液
(40.55μg/ml)、供试品溶液各10μl,注入液相
谱仪,以外标法计算样品中木犀草苷含量。结果
见表2、表3。
2.2绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙
的含量测定
2.2.1谱条件:按2015年版《中国药典》山银
花项下灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量测
定方法[1]进行。谱柱为PhenomenexGemini
C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温30℃;ELSD
检测器漂移管温度:60℃,气体流量2.0ml/min。
理论塔板数按绿原酸峰计算不低于20000,绿原
酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙与其他
万方数据
谱峰分离度均大于1.5。谱图见图2。
A
1
2
3
0102030
B
2
1
3
0102030
t/min
注A:混合对照品溶液;B:供试品溶液;1:绿原酸;2:灰毡毛忍
冬皂苷乙;3:川续断皂苷乙
图2绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的HPLC图
2.2.2溶液制备:①对照品溶液的配制:精密称
取绿原酸对照品21.12mg、灰毡毛忍冬皂苷乙对
照品21.72mg和川续断皂苷乙对照品20.63mg置
于20ml的量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇
匀,作为储备液。再用甲醇逐步稀释至以下所需
要的浓度:绿原酸50.00、102.01、204.02、408.04、
816.08μg/ml;灰毡毛忍冬皂苷乙50.39、100.78、
201.56、503.90、1007.81μg/ml;川续断皂苷乙
9.63、19.27、96.34、192.68、385.37μg/ml的溶液,
即得。②供试品溶液的配制:取金银花或山银花
粉末(过四号筛),取约0.30g,精密称定,置50ml
离心管中,加50%甲醇40ml并混匀,超声处理
40min(功率250W,频率35kHz),5000r/min离
心10min,取上清液转移至50ml量瓶中,离心管
中残渣再加50%甲醇7ml涡旋1min,5000r/min
离心10min,合并上清液至同一量瓶中,加50%
甲醇至刻度,混匀,即得。
2.2.3线性关系考察:称取绿原酸对照品22.06mg,
置20ml容量瓶,用甲醇溶解并稀释至刻度,并稀
释至浓度分别为0.53、
1.07、5.33、10.65、53.27、
106.55、1065.50μg/ml的溶液;精密称取灰毡毛
忍冬皂苷乙对照品21.54mg,置10ml容量瓶,甲
醇溶解并稀释至刻度,并稀释至浓度分别为5.00、
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9.99、49.97、99.95、499.73、999.46、1998.91μg/ml
的溶液;精密称取川续断皂苷乙21.20mg,置20ml
容量瓶中,甲醇溶解并稀释至刻度,并稀释至浓
度分别为4.95、9.90、49.50、99.00、198.01、495.02、
990.04μg/ml的溶液。精密吸取上述各对照品溶液
10μl,按上述谱条件测定峰面积。以峰面积为
纵坐标(A),对照品进样量为横坐标(C)绘制标准曲
线,得绿原酸logA=1.2976×logC+2.6197,R=
0.9995,灰毡毛忍冬皂苷乙logA=1.2753×logC+
2.8162,R=0.9995,川续断皂苷乙logA=1.2818×
logC+2.8366,R=0.9997;表明绿原酸进样浓度
在0.53~1065.50μg/ml范围、灰毡毛忍冬皂苷乙
在5.00~1998.91μ
g/ml范围、川续断皂苷乙在
4.95~990.04μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.2.4精密度考察:取浓度约为200μg/ml的对照品
溶液,连续进样5次,计算绿原酸峰面积的RSD=
0.35%(n=5),灰毡毛忍冬皂苷乙峰面积的RSD=
0.90%(n=5),川续断皂苷乙峰面积的RSD=
1.28%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.2.5稳定性试验:取供试品溶液1份,分别于0、
2、6、12、24h测定,记录峰面积,结果绿原酸
峰面积的RSD=0.52%(n=5),灰毡毛忍冬皂苷乙
峰面积的RSD=0.61%(n=5),川续断皂苷乙峰面
积的RSD=0.99%(n=5),表明供试品溶液在24h
内稳定性良好。
2.2.6重复性试验:称取同一批样品粉末6份,按上
述方法测定,计算绿原酸平均含量为5.42%,
RSD=
0.62%(n=6),灰毡毛忍冬皂苷乙平均含量7.65%,
RSD=0.93%(n=6),川续断皂苷乙平均含量为
0.86%,RSD=0.97%(n=6),表明重复性良好。
2.2.7加样回收率试验:在已测定含量的山银花
样品中加入定量对照品,测定5次,绿原酸平均
回收率为93.65%,RSD=0.72%;灰毡毛忍冬皂苷
乙平均回收率为100.78%,RSD=2.63%;川续断
皂苷乙平均回收率为102.24%,RSD=1.34%。
2.2.8样品测定结果:精密吸取“2.2.2”项下配
制的5种浓度对照品溶液、供试品溶液各10μl,
注入液相谱仪,以外标曲线法对数方程计算样
品中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙
的含量。见表2、表3。
表219批金银花含量测定结果(%)
基源来源/产地灰毡毛忍冬皂苷乙川续断皂苷乙皂苷总量木犀草苷绿原酸
忍冬桂林普兰德生物科技有限公司/恭城县栽培00.240.240.0713.08
云南鸿翔中药科技有限公司/山东0000.0593.52
玉林中药材市场/山东00.090.090.0633.52
玉林中药材市场/山东0.430.080.510.0572.85
河北安国药材市场/河北0000.0423.03
康美药业股份有限公司/河南0000.0533.61
玉林祥生中药饮片公司/不详2.020.192.210.0443.54
自采/广西桂林市郊区01.301.300.0100.06
河北安国药材市场/河南0000.0672.92
自采/广西桂林市郊区00.920.920.0312.63
湖南馨恒堂中药科技有限公司/山东0000.0332.91
亳州市京皖中药饮片厂/河南0000.0493.14
安徽神州中药饮片有限公司/河南0000.0582.58
成都康美药业有限公司/河南0000.0463.25
成都康美药业有限公司/河南0000.0353.16
康美药业股份有限公司/河南0000.0423.10
自采/北京市顺义区0000.0291.08
玉林中药材市场/山东0000.0522.72
玉林中药材市场/山东1.090.271.200.0191.17
万方数据
·930· 国际中医中药杂志2016年10月第38卷第10期IntJTradChinMed,October2016,Vol.38,No.10
表331批山银花含量测定结果(%)
基源
红腺忍冬
华南忍冬
来源/产地灰毡毛忍冬皂苷乙川续断皂苷乙皂苷总量木犀草苷绿原酸
灰毡毛忍冬自采/广西南丹县芒场镇8.290.568.850.0051.86
湖南高桥药材市场/湖南6.040.436.470.0105.18
四川成都荷花池药材市场8.941.1110.050.0104.47
湖南邵阳市隆回县7.310.878.180.0136.44
贵州遵义洪关6.600.597.190.0224.97
浙江永嘉县桥下镇7.140.607.740.0145.73
南宁市乾瑞生态农业合作社/广西南丹7.070.557.620.0165.30
重庆武隆县巷口镇6.850.467.310.0134.32
广西资源县梅溪乡6.630.897.520.0075.10
玉林中药材市场/湖南6.190.676.860.0154.14
玉林中药材市场/广西5.210.605.810.0174.02
安徽井泉集团中药饮片有限公司/广西4.750.405.1503.02
广西忻城县北更乡2.623.516.130.0074.86
广西忻城县1.872.194.060.0044.91
广西马山县古寨乡2.953.076.020.0026.43
广西马山县2.222.654.870.0014.98
浙江永嘉县桥下镇04.504.500.0012.10
浙江乐清东亚石斛有限公司03.533.530.0091.71
浙江乐清县雁荡山03.823.820.0152.74
河北安国中药材市场04.454.450.0012.17
安徽亳州中药材市场2.873.806.670.0023.84
广西都安县1.952.704.6502.85
广西都安县3.155.578.7202.81
广西忻城县2.183.385.5605.15
广西忻城县北更乡5.990.346.330.0015.15
广西忻城县6.400.366.760.0015.75
广西忻城县北更乡3.250.824.070.0023.34
玉林中药材市场/贵州0.098.528.610.0130.75
4.794.920.0130.60玉林中药材市场/贵州0.13
黄褐毛忍冬广西百市隆林县桠杈镇0.102.983.080.0160.92
广西药用植物园0.3000.300.0041.19
3讨论
3.1木犀草苷含量情况
19批金银花样品均含木犀草苷,平均含量为
0.045%,其中仅有8批符合《中国药典》规定的
不得少于0.050%;山银花4个基源共31批样品中,
有27批含木犀草苷,但含量均低于0.050%。木犀
草苷平均含量高低顺序为金银花>黄褐毛忍冬>
灰毡毛忍冬>红腺忍冬>华南忍冬。
3.2总皂苷含量情况
19批金银花中,仅7批含川续断皂苷乙,其
中3批含灰毡毛忍冬皂苷乙,总皂苷含量较低,
在0.09%~2.21%范围;12批灰毡毛忍冬均含2种
皂苷成分,总皂苷平均含量为7.40%;15批红腺
忍冬均含皂苷成分,但有4批不含灰毡毛忍冬皂
苷乙,总皂苷含量平均为5.34%;3批黄褐毛忍冬
中总皂苷含量平均为5.54%;华南忍冬含总皂苷
0.30%。总皂苷平均含量高低顺序为:灰毡毛忍冬>
黄褐毛忍冬>红腺忍冬>华南忍冬>金银花。
3.3绿原酸含量情况
19批金银花中绿原酸含量平均为2.72%,有
15批符合《中国药典》规定(不得少于1.50%);
12批灰毡毛忍冬中绿原酸含量平均为4.55%,其
万方数据
国际中医中药杂志2016年10月第38卷第10期IntJTradChinMed,October2016,Vol.38,No.10 ·931·
中11批符合《中国药典》规定(不得少于2.00%);
15批红腺忍冬中绿原酸含量平均为3.92%,其中
14批符合《中国药典》规定;3批黄褐毛忍冬中绿
原酸含量平均为0.76%,1批华南忍冬绿原酸含量
为1.19%,均不符合《中国药典》规定。绿原酸平
均含量由高到低依次为:灰毡毛忍冬>红腺忍冬>
金银花>华南忍冬>黄褐毛忍冬。
总体上看,金银花木犀草苷含量较高,绿原
酸含量较低,不含或少含皂苷类成分;相比之下,
灰毡毛忍冬和红腺忍冬含绿原酸和总皂苷较高,
少含或不含木犀草苷。从测定50批样品的结果看,
不同样品中主要成分的有无及含量高低不仅与植
物品种、基源有关,也与产地、加工方法有关。
因此,根据木犀草苷或皂苷成分的有无判定是金
银花或山银花是不可靠的。
3.4关于金银花与山银花质量的综合评价问题
金银花与山银花均为忍冬属植物的花,主要
含有机酸类(绿原酸、咖啡酸等)、黄酮类(木犀草
苷等)、皂苷类(灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷
乙等)、挥发油类成分。木犀草苷具有较强的杀菌
消炎,解热镇痛的功效[5];绿原酸具有抗氧化、抗
肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、降糖等多种作
用[6];川续断皂苷乙对革兰阳性金黄葡萄球菌、
表皮葡萄球菌和革兰阴性绿脓杆菌、大肠杆菌、
阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌均具有抗菌活性[7];灰
毡毛忍冬皂苷乙有保肝、抗肿瘤及免疫调节作用
等;挥发油有抗菌、抗炎、解热、止咳等作用。
这些成分的药理作用大体上与金银花、山银花的
清热解毒、疏散风热功能相关。因此,目前主要
以这些成分的含量作为质量评价指标。由于中药
普遍存在多组分共存、多种药理作用综合起效的
情况,仅依据其中某一种成分的含量高低判定其
质量优劣显然不科学。因此,我们既不能因金银
花中木犀草苷含量比山银花高就认为其质量更
好,也不能因山银花绿原酸和皂苷含量高就认为
其质量更优。而是应根据各成分的药理作用特点
万方数据
和临床用药目的进行综合评价。据报道,灰毡毛
忍冬和忍冬的有效成分含量存在较大差异,但均
有明显地抑菌杀菌作用,且在抗菌、抗炎、解热、
免疫调节等方面,灰毡毛忍冬与忍冬作用相当[8]。
3.5关于山银花品种问题的建议
2015年版《中国药典》收载的山银花包括灰
毡毛忍冬、红腺忍冬、黄褐毛忍冬、华南忍冬4个
基源。经调查研究发现,目前山银花的主要基源
是灰毡毛忍冬,红腺忍冬次之;黄褐毛忍冬仅在
贵州和广西隆林县有产,华南忍冬已无商品供应,
野外采集标本都不易找到。含量测定结果表明这
2个基源的几种成分含量都偏低,不符合药典规
定。建议今后不再收载黄褐毛忍冬和华南忍冬。
3.6关于金银花与山银花区别使用的建议
根据现有的研究结果,金银花与山银花的成
分各有特。鉴于山银花总皂苷含量较高,金银
花只有少数批次含皂苷。建议中成药注射剂应使
用金银花,且在投料前应先做皂苷限量检查,以
免产生安全风险。对于汤剂配方、口服或外用的
中成药,金银花与山银花均可通用。
参考文献
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3969/.1001-1978.2012.11.024.
(收稿日期:2016-02-26)
(本文编辑:张琪)
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