测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量
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第32卷第l6期
2007年8月
中国中药杂志
China Journal of Chinese Materia Medica
V01.32.Issue 16
August,2007
合体内试验一同评价。
体内转运试验中挑选的是健康志愿者,与溃疡
性结肠炎患者的胃肠道环境与健康状态是不同的,
应考虑到差异性。
进一步研究。
[参考文献】
[1]中国药典[S].一部.2000:附录xc62.
[2] M Turkoglu,T Ugurlu./n vitro evaluation of pectin·HPMC eom-
pression coated 5-aminosalieylic acid tablets for colonic delivery
但目前使用的酶依赖靶向辅料研究比较有限。
其中果胶使用最广,但果胶的亲水性是最大问题。
试验中通过加入一定比例的HPMC,改善了亲水性,
但是HPMC改变果胶亲水性的机制尚不清楚,有待
[J].Eur J Pharm Biopharm,2002,53(1):65.
[3] 闫惠俊,龙致贤,王玉蓉,等.肠安康微丸结肠靶向验证实验
[J].中成药,2003,25(7):523.
/n vivo/in vitro evaluation of Kangfuxin colon targeting capsules
QIU Xue.1an ,YANG Ming2,XIE Xing.1iang2,LAI Juan ,CHEN si-wei
(1.Chengdu University ofTraditional Chianesne Medicine,Chengdu 611730,Chia;n
2.West Chia nSchool ofPharmacy Sichuan University,Chengdu 610041,Chia)n
[Abstract] Objective:To evaluate the release in fixed position of pH·dependent and enzyme,dependent Kangfuxin colon targe-
ting capsules in vivo and in vitro.Method:The dissolution was tested in vitro and X·ray radiography Was used for the evaluation in vi-
VO.Result:After two hours pH.dependent colon targeting in man—made colon fluid,medicine release in fixed position on the whole,
colon loc-release.Add enzyme into man—made colon,when enzyme·dependent colon targeting in it,then medicine release quickly,
mainly release in fixed posiiton;The conveying time in vivo of pH-dependent and enzyme··dependent capsules have big individuality
diference.In the experiment,disintegration is stabilize among individuales,between 2.0~3.5 hours.Conclusion:Kangfuxin colon
targeting capsules of two principles all release in fixed position to achieve the goa1.
[Key words]kangfuxin;colon targeting;dissolution;X-ray radioraphy g[责任编辑鲍雷]
测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量
董晓兵 ,李 军 ,姜 勇 ,董婷霞 ,屠鹏飞 ,詹华强
2.香港科技大学中药研发中心暨生物系,香港;
(1.澳门大学中华医药研究院,澳门;
3.北京大学药学院 天然药物学系,北京100083)
[摘要] 目的:建立含远志中成药中细叶远志皂苷的含量测定方法。方法:采用高效液相谱法,Alhima
C18谱柱(4.6 mm×250 mm,5 m),流动相甲醇一0.05%磷酸溶液(65:35),检测波长202 am,流速1.0 mL·
min~。结果:细叶远志皂苷的理论塔板数为2 500。回归方程Y=5.239×10。X一6.247×10’(r =0.999 4),线
性范围10~500 Ixg·mL~,平均回收率为97.5%(RSD均小于3.0%),最低检出浓度为5.50峭·mL’。。结论:检
测含远志中成药中细叶远志皂苷含量方法简便,结果准确,重现性好,可作为含远志的复方制剂质量控制标准。
[关键词]HPLC;天王补心丸;归脾丸;远志;细叶远志皂苷;含量测定
[中图分类号]R 284[文献标识码]A[文章编号]1001-5302(2OO6)16-1647-03
天王补心丸和归脾丸均收载于中华人民共和国
【收稿日期]2007.01-20
【通讯作者]
ust.hk
药典2005年版一部,天王补心丸由丹参、当归、五味
董晓兵,Tel:(00852)23587318,E—mail:dxbaa@
子、远志等l6味制成蜜丸,功能滋阴养血,补心安
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神,用于心阴不足,心悸健忘,失眠多梦,大便干
燥…;归脾丸由党参、白术、远志等11味制成蜜丸,
功能益气健脾,养血安神,用于心脾两虚,气短心悸,
失眠多梦,头昏头痛,肢倦乏力,食欲不振,崩漏便
血…。中国药典没有记载这2种中药的含量测定方
法。远志具有安神益智的功效,在这2种中成药中
都是重要的成分,皂苷类成分是远志的主要活性成
分¨4 。2005年版药典中以远志酸作为对照品对远
志药材进行含量测定…,但是远志酸是远志总皂苷
酸水解的产物之一 ,测定其含量不能代替远志中
总皂苷的含量。细叶远志皂苷是远志总皂苷碱水解
生成的次级皂苷,远志总皂苷经碱水解均能转化为
细叶远志皂苷I6' 。因此本课题组建立以细叶远志
皂苷作为指标成分来检测远志总皂苷的含量,并对
不同厂家生产的天王补心丸和归脾丸进行了细叶远
志皂苷的含量测定。
1仪器与试药
Waters高相液相谱仪(Waters 600 Controller,
AF在线脱气机,Waters 717自动进样器);Waters
996二极管阵列检测器,Empower谱工作站,超声
清洗仪(BRANSONIC,240 W,50 Hz),CH-920旋转
蒸发仪(BUCHI)。
细叶远志皂苷自制 (采用HPLC,IR,MS,”c—
NMR和 H—NMR鉴定,纯度>98%),天王补心丸和
归脾丸购于市场上不同药店,水(milli—Q,Millipore
s.A.Molsheim,France),甲醇(谱纯,PROLA—
BO),85%磷酸(分析纯,VWR)。
2方法与结果
2.1谱条件和系统适应性试验Alltima C18
谱柱(4.6 mm×250 mm,5 I.zm);流动相甲醇
0.05%磷酸溶液(65:35);检测波长202 nm;流速
1.0 mL·min~;进样量1O IxL;柱温为室温;采集时
问30 min。见图1。在谱图中,细叶远志皂苷的
保留时间为17.2 min,与相邻峰的分离度均大于1.
5,理论塔板数为2 500。
2.2对照品溶液制备精密称取细叶远志皂苷5
mg,置5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得
对照品储备液。
2.3供试品溶液的制备取样品粉末(3号筛)2.0
g,精密称定,置100 mL磨口锥形瓶中,加甲醇25 mL,
超声处理30 min×2,滤过,合并滤液,蒸干,加10%
NaOH溶液50 mL,加热回流2 h,冷却,加浓HC1调
】648·
0 5 l0 l5 20 25 30
图1对照品与样品的HPLC图
A.对照品;B.归脾丸;c.天王补心丸;D.归脾丸缺远志阴性对
照;E.天王补心丸缺远志阴性对照
pH 4~5,用正丁醇萃取3次,每次50 mL,合并正丁
醇萃取液,回收溶剂,残渣用甲醇溶解并定容至25
mL量瓶中,0.45 m滤膜滤过,即得供试品溶液。
2.4阴性对照样品溶液的制备按照药典中归脾
丸和天王补心丸的处方和制备工艺制备缺远志的阴
性对照丸,再按上述供试品溶液的制备方法制备阴
性对照液。
2.5线性关系考察和最低检出浓度精密量取细
叶远志皂苷对照品储备液适量,用甲醇稀释成系列
浓度(/t'=6)分别进样1O ,记录谱峰面积,以
对照品进样浓度 ( g·mL )对峰面积均值y进
行线性回归,得回归方程Y=5.239×10。X一6.247
×10 (r =0.999 4),细叶远志皂苷在1O~500 g
·mL 与峰面积呈良好线性关系。
将细叶远志皂苷对照品溶液适当稀释后,进样,
以峰高为基线噪音3倍计算,最低检出浓度为5.5O
Ixg·mL~。
2.6精密度试验精密吸取同一浓度对照品溶液,
连续进样5次,记录细叶远志皂苷保留时问和谱
峰面积值,RSD分别为0.45%和1.07%。
2.7重复性试验精密称取同一样品5份,分别按
供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样1O ,
记录细叶远志皂苷的谱峰面积值,计算细叶远志
皂苷的含量,RSD为2.75%。
2.8稳定性试验取同一个样品供试液,室温放置,
在上述谱条件下于0,2,4,6,8,12,分别进样,记录细
叶远志皂苷的谱峰面积值,RSD为1.45%。
2.9空白干扰试验精取阴性对照液按上述谱
条件测定,在细叶远志皂苷处无吸收峰,表明归脾丸
和天王补心丸中的其他组分不干扰细叶远志皂苷的
测定,见图1。
2.10加样回收率精密称取已知含量天王补心丸 维普资讯
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细粉各2.0 g,共5份,分别精密加入细叶远志皂苷
适量(加入量约为样品含量得100%)。按供试品溶
为天王补心丸和归脾丸中不可或缺的一味中药。远
志总皂苷是远志中的主要活性成分,因此选择远志
总皂苷来控制这2种中成药的质量十分必要。细叶
远志皂苷是远志总皂苷碱水解的产物,远志总皂苷
液制备方法制备供试液,依法测定含量,计算回收
率,结果平均回收率为97.5%,RSD为2.46%。
2.11样品含量测定取各个批号的样品各3份,
按供试品溶液制备方法处理,照上述谱条件测定。
测定结果见表1。
表1不同厂家2种中成药中细叶远志皂苷含量
通过碱水解均能转化为细叶远志皂苷,作者通过碱
水解处理样品,采用HPLC法测定两种含远志的中
成药中细叶远志皂苷的含量,具有方法简便、准确、
重现性好的优点,细叶远志皂苷可作为远志复方制
剂中远志质量控制的指标。
[参考文献]
[1]中国药典[S].一部.2005:107,360,419.
[2] 肖平.镇咳、平喘、祛痰中药的药理作用[J].中成药研究,
1984,8:25.
[3]彭汶铎,许实波.四种远志皂苷的镇咳和祛痰作用[J].中国
药学杂志,1998,33(8):491.
[4]Nikaido T,Ohmoto T,Saitoh H,et a1.Inhibition of cyclic adeno—
sine monophosphate phosphodiestemse in Polygala tenuifolia[J].
Chem Pharm Bill,1982,30(6):2020.
3讨论
分别考察了甲醇.水、乙腈.水、甲醇-0.05%磷酸
水和乙腈-0.05%磷酸水等4个溶剂系统,结果发现
甲醇.().05%磷酸水作为流动相对照品分离度和峰
形最好。同时考察过用ELSD作为检测器,结果其
灵敏度很低,远不如UV 202 Illi1。在UV 202 Illi1,细
叶远志皂苷的最低检出浓度为5.50 g·mL~,由
此可以看出,其灵敏度较高。
天王补心丸和归脾丸为常用中成药,但是其含
[5]Dugan J J,Mayo P,Starratt A N.Polygalic acid[J].Tetrahed—
rOB Letters,1964,5(37):2567.
[6]Pelletier S W,Nakamura S,Soman R,et a1.Constituents ofloo—
lygala species:the structure of tenuifolin,a prosapogenin from P.
senega and P.tenuifolla[J].Tetrahedron,1971,27(19):
4417.
[7] 董晓兵,李军,董婷霞,等.远志皂苷标准品Tenuifolin的制
备『J].中药新药与临床药理,2007,18(1):56.
量测定方法未见报道。远志具有安神益智的作用,
Determination of tenuifolin in Tianwang Buxinwan and Guipiwan by HPLC
DONG Xiao—bing ._,LI Jun ,JIANG Yong3,ZHENG Ying ,DONG T.X.Tina ,TU Peng—fei ,TSIM W.K.Karl
f 1.Institute ofChinese Medical Sciences ofMacau University,Macau,China;
2.Centerfor Chiesne Medicie R&D nand Department ofBiology.The Hung Kong University
fScioence and Technology,Hung Kong,China;
3.Departentm ofNatural Medicies,Schooln ofPharmaceutcial Sciences,Peking University Health
Sciecen center,Be ng 100083,Chia)n
[Abstract]Objective:A quantitative method was developed for the determination of tenuifolin in Tianwang Buxinwan and Guipi—
wan by HPLC.Method:The samples were separated by Alltima C18 column(4.6 mm x 250 mm,5 trm)using methanol一0.05%
phosphoric acid(65:35)as a mobile phase,flow rate was 1.0 mL·min~and wavelength was set at 202 nm.Result:Tenuifolin Was
detected in both Chinese preparations.The number of theoretical plates calculated by tenuifolin peak was 2 500.The regression equa—
tion 0ftenuifolin was Y=5.239×10 X-6.247×10 (r =0.999 4)and the liner range Was 10—500 g·mL_。.The average recovery
of tenuifolin Was 97.5%f RSD less than 3.0%).1’he LOD of tenuifolin was 5.50 g·mL_。.Condusion: I’he method is sensitive,
rapid and accurate.
[Key words]HPLC;Tinwaang Buxinwan;Guipiwan;Radix Polygalae,tenuifolin,quantitative determination
[责任编辑鲍雷]
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