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HIV抗体初筛实验室风险评估报告

1.评估目的

获得性免疫缺陷综合症（AIDs）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的严重威胁人类健

康的性传播疾病，临床实验室工作人员每天处理着大量血液标本，因此他们面临着严峻的

HIV职业暴露危险，保护临床检验人员的健康，已成为迫切需要解决的问题。此次评估的主

要目的是在实验活动中根据HIV可能对个体或体或实验环境造成危害的高低来制定相应

措施的安全防范制度和操作程序，选择相应等级的生物实验室及设备配置，实验人员使用相

应措施的防护措施和使用相符的安全防护设备，以及在发生意外泄漏或意外事故时能及时采

取有效措施，来达到确保实验工作人员不被感染和实验环境不被污染的目的。

2.评估依据

2.1病原微生物实验室生物安全管理条例

2.2实验室生物安全通用要求GB19489-2008

2.3人间传染的病原微生物名录

2.4WHO实验室生物安全手册

2.5艾滋病防治条例

2.6中华人民共和国传染病防治法

2.7可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定

2.8全国艾滋病检测技术规范2009年修订版

3、危害程度分类

3.1分类等级

在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将此病毒列为第二类病原微生物，属能引

起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属，但一般情况下对未与HIV无症状携带和艾

滋病患者有性接触和血液传播的健康工作者、体、家畜或环境不会引起危害的病原微生物。

3.2不同实验操作生物安全实验室级别要求

HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合Ⅱ级生物安

全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。本实验室是HIV初筛实验室，应用ELISA

方法进行HIV抗体筛查。根据《名录》的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验

室进行。

4、生物因子的特性

4.1HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。迄今为止，根

据血清学反应和病毒核酸序列测定，全球流行的HIV可分为2型：HIV1型和HIV2型。在

HIV1型内，根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步

分为3个组：Ｍ组（主要组）、Ｏ组（外围组）和Ｎ组（新组或非M非O组），Ｍ组内又可分

为ＡＪ10个亚型。在HIV1型和HIV2型之间，其核苷酸序列有45％的同源性，并且存在

免疫交叉反应。应用免疫印迹法(Westblot)可以将二者明确地区别开来。

4.2环境中的稳定性：HIV对理化因素抵抗力较弱，56℃加热30min可被灭活，但在室温下

可存活7天。经化学消毒剂0.5%次氯酸钠、10%漂白粉、50%乙醇、0.3%H2O2、5%来苏儿处

理10min可被灭活。紫外线对该病毒无杀灭作用。

4.3变异性：HIV基因组可发生变异，最易发生变异的基因编码包膜糖蛋白env和调节基因

nefc，根据env基因序列异同可将HIV-1型分为A、B、C、D、E、F、H、O8个亚型。Env

的变异率为千分之一。

4.4传染源：主要的是HIV携带者及AIDS患者。

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4.5传播途径：主要通过血液传播、母婴传播、性传播、医源性感染。

4.6易感性：免疫功能低下者、结核病患者、器官移植者、输血及用血液制品者、性滥者、

同性恋、者高危性人易感。

4.7潜伏期：是从HIV感染到出现艾滋病临床症状和体征的时间。平均潜伏期(50％的HIV

感染者进展到艾滋病期的时间)为7年～8年。在感染后的一般需要2-12周，平均45天左

右血液中才可检测到HIV抗体。从感染到机体产生抗体的这一段时间检测不到HIV抗体，医

学称之为窗口期。在窗口期虽测不到HIV抗体，但若被感染，体内同样有HIV病毒，同样具

有传染性。

4.8剂量-效应（反应）关系：

4血液中HIV浓度达1.00×10拷贝/ml，被HIV污染环境的锐器剌伤而感染的比率为0.3%；

可致人患艾滋病

4.9致病性：HIV病毒侵入后，其表面糖蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和

力结合，吸附到宿主细胞上；gp120再与宿主细胞表面辅助受体相互作用，使病毒与宿主细

胞膜更接近；gp41产生一系列构象变化，其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒

包膜与细胞膜的最终融合，病毒RNA进入细胞。在HIV感染后，最先能够监测到病毒RNA、

然后是p24抗原，最后是抗体。在感染后的10～14d内，病毒RNA水平是呈指数上升，随

后下降并保持在持续稳定的水平上，进入HIV无症状期。p24抗原水平随着病毒RNA水平的

发展而发展，在急性感染期就可以出现，被认为是病毒复制的间接标志，但由于检测方法的

灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚。从HIV感染到能够检测出HIV抗体这一时期，被

称作“窗口期”。在窗口期，能够通过病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV

感染。CD4淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降，当其在血液中细胞下降到200个/mL

时，就会发生严重的免疫缺陷，患者就被确诊为艾滋宿主范围：宿主范围较为广泛。

5、流行病学、诊断、治疗和预防

5.1流行病学自1981年美国首次报告艾滋病以来，被西方人成为“20世纪的瘟疫”。这种病

以侵袭免疫细胞CD4为主，造成细胞免疫功能缺陷，并继发体液免疫功能缺陷。自1985

年我国首次报道例以来艾滋病在我国的流行呈逐年上升的趋势，目前已进入快速增长期。随

着艾滋病流行趋势的日益严重，临床就诊的患者也越来越多，患者和无症状病毒感染者是本

病的传染源。病毒主要存在于感染者的血液、精液、子宫和分泌物中，也可在汁、唾

液、尿液和眼泪中分离到病毒，但以血液、精液、子宫和分泌物中的病毒滴度最高，而

其他体液(唾液、尿液和眼泪)由于病毒滴度低而不足以构成传染。高危人有静脉注射毒者、

性病患者、暗娼、HIV感染者的婴儿、部分有偿供血者、多次输血和血制品者及血透者。HIV

传播的先决条件为大量而完整的传染性病毒进入易感者的恰当门户，感染HIV的可能程度取

决于接触患者体液的机会、接触次数、病毒量以及是否采取保护措施。

5.2临床表现

从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程，临床上将这个过程分为四期：急性感染期、

潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。不是每个感染者都会完整的出现四期表现，但每个疾

病阶段的患者在临床上都可以见到。

5.2.1急性感染期

窗口期也在这个时间。HIV侵袭后对机体的刺激所引起的反应。病人发热、皮疹、淋巴

结肿大、还会发生乏力、出汗、恶心、呕吐、腹泻、咽炎等。有的还出现急性无菌性脑膜炎，

表现为头痛、神经性症状和脑膜刺激症。

5.2.2潜伏期感染者可以没有任何临床症状，但潜伏期不是静止期，更不是安静期，病毒

在持续繁殖，具有强烈的破坏作用。潜伏期指的是从感染HIV开始，到出现艾滋病临床症状

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和体征的时间。艾滋病的平均潜伏期，现在认为是2-10年。这对早期发现病人及预防都造

成很大困难。

5.2.3艾滋病前期

潜伏期后开始出现与艾滋病有关的症状和体征，直至发展成典型的艾滋病的一段时间。主要

的临床表现有：.淋巴结肿大此期最主要的临床表现之一；全身症状病人常有病毒性疾病

的全身不适，肌肉疼痛等症状；各种感染此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身症状外，

患者经常出现各种特殊性或复发性的非致命性感染。

5.2.4典型的艾滋病期

有的学者称其为致死性艾滋病，是艾滋病病毒感染的最终阶段。此期具有三个基本特点：

严重的细胞免疫缺陷；发生各种致命性机会性感染；发生各种恶性肿瘤。艾滋病的终期，免

疫功能全面崩溃，病人出现各种严重的综合病症，直至死亡

5.3实验室诊断

5.3.1HIV抗体检测检测HIV抗体是常规使用的HIV病原学诊断的方法。HIV抗体检测方法

有初筛试验和确认试验组成。初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断。目前的HIV

抗体检测都是使用新一代试剂，可同时检测HIV1型和HIV2型。初筛检测的方法有间接酶

联免疫吸附试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）和金标法（SPOT），确认检测的方法

为蛋白印迹试验（WB）。医生一般会根据病人的感染史，如供血史、受血史、性接触史、

、高危职业等结合临床体征对病人进行HIV检测。检测出HIV抗体的时间取决于HIV

感染者的反应性和HIV病毒的特性，一般在感染后1—3个月出现HIV抗体。HIV抗体初筛

结果阴性者或可疑者，半年后可进行第二次检测，但不需要多次检测。HIV抗体初筛结果

阳性者，须进一步做确证试验。确证试验报告HIV抗体可疑的病人，应在3个月后进行复

查。确证结果阳性者都具有HIV特异的带型，确认结果是可靠的。

5.3.2P24抗原检测P24抗原检测是诊断早期HIV感染的一种方法。HIV感染者多数在感染

1—3个月才出现HIV抗体，抗体出现之前的这个时期称为“感染后窗口期”。在窗口期，

HIV抗体是检测不到的。P24抗原的检测有助于多数急性感染者血清HIV抗体阳转之前的诊

断，大约可以使抗体窗口期缩短1周，因为估计检测P24抗原到检出P24抗体间隔只有1

周时间。但由于不是所有新近感染的人都可以检出P24抗原，加上该项检测费用较高，所

以一般不作为常规诊断项目。

5.3.3白细胞和淋巴细胞检测医生对HIV抗体确认为阳性者进行临床分期或治疗时，才需

要做一些辅助性实验室检查，如白细胞和淋巴细胞检测。AIDS病人周围白细胞及淋巴细

胞总数是下降状态，淋巴细胞的变化可用于评价机体免疫系统损害的程度，CD4值对于评

价HIV感染的病期及预后极为重要，特别是病程后期更为重要。

（1）WBC、Hb下降。

（2）CD4T淋巴细胞总数下降，＜200/mm3，或为200~500/mm3。

（3）CD4/CD8比值＜1（正常时，CD4/CD8比值＞1）。

（4）测定β2微球蛋白，AIDS病人明显增高。

5.3.4PCR检测HIV核酸聚合酶链反应（PCR）是检测特定的DNA和RNA片段的非常敏感

的方法。定量PCR技术是测定HIV载量、预测疾病进程的主要方法。尽管HIV和PCR检测

有上述一些用途，但是它不能作为HIV感染的常规诊断方法，只能用于特殊情况下的早期

HIV感染、判断婴儿HIV感染，以及血清学不确定结果的验证和补充。在HIV的基础研究

如测定HIV载量、分析HIV基因的亚型和变异等方面，PCR方法具有重要的用途。

5.3.5病毒分离培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且HIV的分离率在30%~60%，

这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究。

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5.4诊断原则

艾滋病和HIV感染是因感染HIV引起产生以免疫缺陷为主要特征的慢性综合病症，流行

病学资料有一定的参考价值，临床表现特异性不强，需与其他病因引起的类似症状相鉴别，

但有些特殊的机会性感染和肿瘤可作为诊断和临床分期的指征。HIV／AIDS的诊断原则是以

实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。

5.5艾滋病诊断标准：

5.5.1艾滋病病毒抗体阳性，又具有下述任何一项者，可为实验确诊艾滋病病人。

（1）近期内（3-6个月）体重减轻10%以上，且持续发热达38℃一个月以上；

（2）近期内（3-6个月）体重减轻10%以上，且持续腹泻（每日达3-5次）一个月以上。

（3）卡氏肺囊虫肺炎（PCR）

（4）卡波济肉瘤KS.

（5）明显的霉菌或其他条件致病感染。

5.5.2若抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻症状接近上述第1项时，可为实验确诊艾滋病病

人。

（1）CD4/CD8（辅助/抑制）淋巴细胞计数比值<1，CD4细胞计数下降；

（2）全身淋巴结肿大；

（3）明显的中枢神经系统占位性病变的症状和体征，出现痴呆，辩别能力丧失，或运动神

经功能障碍。

5.6治疗：应用核苷类逆转录酶抑制剂药物：叠氮胸苷（ACT）、2，3-双脱氧肌酐（DDI）、

拉米夫定能干扰病毒DNA合成。非核苷类逆转录酶抑制剂药物：德拉维丁、耐维拉平、赛科

纳瓦、瑞托纳瓦、英迪纳瓦还有鸡尾酒疗法。

5.7预防：因现无艾滋病疫苗接种，实验室工作人员加强生物安全防范意识，规范操作，

同时锻炼身体，增强机体免疫力，尽量避免暴露事件的发生。

5.7.1避免共用针筒①远离。②切勿共用针筒注射。

5.7.2减少血液接触不少疾病，如艾滋病、乙型肝炎等都会透过血液传染，因此，但凡

处理伤口:①避免皮肤、眼睛或口腔接触到别人的血液。②先戴上用完即弃的胶手套，才

替别人护理伤口。

5.7.3防止母婴感染

做母亲的，只有确保自己没有染上HIV，才能令婴儿免受感染。假如夫妇未能确定彼此是

否带有病毒，在决定怀孕前应先进HIV抗体测试。

5.7.4避免性滥,使用安全套。

6、实验室常规活动和非常规活动过程中的风险识别及风险控制

风险识别

1.常规活动

1.1样品的接

收与开启：由

于打开盛装标

本容器瞬间可

能产生气溶

胶。

1.2加样时操

作不当污染容

风险范围

仅限于本

实验室

性质

中等

时限

很短

发生概

率

降低风险措施风险可接

受性

可接受易发生已建立《HIV抗体

筛查实验室技术

操作责任制度》

必须在生物安全

柜中打开样本和

加样。

已制定《HIV抗体

筛查实验室生物

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器外部产生气

溶胶。

1.3废弃物处

理不当，造成

污染。

1.4样品运输

过程中发生泄

漏，造成污染。

安全要求》见附

件。

已制定《HIV抗体

筛查实验室废弃

物处理和消毒制

度》见附件。

已制定《HIV抗体

筛查标本接收及

运送标准操作程

序》和《HIV抗体

筛查实验室筛查

阳性本送检制

度》见附件。

中等很短较低已制定《实验室可接受

人员准入制度》

（见附件）

2.非常规活动仅限于本

2.1进修实习实验室

人员参与实验

活动。

2.2外来人员

误入工作区

域，被感染。

3.意外事故

3.1盛装标本

容器破碎、溢

出瞬间可能产

生气溶胶。

3.2锐器如注

射器、加样

头误伤造成血

液传播。

仅限于本

实验室

严重很短较低已制定《HIV抗体可接受

筛查实验室意外

事故处理制度》

（见附件）。

已建立《HIV抗体

筛查实验室职业

暴露后的预防措

施》尽量减少锐

器使用，用后要

放入耐针剌、不

渗漏的锐器盒

中，避免误伤。

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4.已发生实验

室感染案例分

析。美国曾报

道有16例，云

南省德宏州发

生过1例经实

验室暴露事故

而感染。其中

主要原因有工

作人员被带有

HIV的针头或

玻璃损伤;或

有伤口的部位

接触到被含

HIV病毒血液

标本感染。针

剌暴露概率

0.4%，粘膜暴

露概率0.1%；

完整皮肤暴露

概率为0；一旦

发暴露，应立

即服用阻断艾

滋病病毒传播

的药物，可使

被感染率降低

75％。

5.设施

5.1实验室分

区不合理：无

清洁区、半污

染区、污染区

的设置，可造

成整个区域污

染。

6.设备

6.1生物安全

柜：

6.1.1送风口

被物品阻挡、

气溶胶不能被

有效排出。

6.1.2生物安

仅限于实

验室

极严重很短极低本实验室已制定

《HIV抗体筛查

实验室生物安全

要求》、《HIV抗体

筛查实验室意外

事故处理制度》

和《HIV抗体筛查

实验室职业暴露

后的预防措施》

见附件。

分析资料来源见

本报告中：9、主

要参考文献中的

9.11和9.12

可接受

仅限于本

实验室

严重很长极低已根据《全国艾

滋病检测工作管

理办法》附件1

《艾滋病实验室

的基本标准》中

对HIV实验室的

要求分区设置。

可接受

仅限于本

实验室

一般很短较低已制定《HIV实验可接受

室Ⅱ级生物安全

柜使用标准操作

程序》（见附件）

定期更换除菌滤

膜，定期检测高

效过滤器一旦有

泄漏必须由厂家

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全柜中的中效

过滤器和高效

过滤器，使用

一段时间后就

会被污染。

6.2酶标仪被

污染。

6.3离心机：离

心时离心管暴

裂产生气溶

胶。

处理或更换。

实验室中所使用

的酶标仪、生物

安全柜和移液器

等强制检验校准

仪器，已通过上

级计量部门定期

检测校准。

已建立《酶标仪

标准操作程序》、

《KA1000C离心

机标准操作程

序》（见附件）可

使用封闭式的离

心桶。

一般很短较低已建立《HIV抗体可接受

筛查实验室检测

人员管理与培训

制度》见附件。

已建立《人员健

康监护管理程

序》和《员工体

检管理制度》（见

附件）。

建有《实验室安

全防护制度》和

《HIV抗体筛查

实验室人员安全

制度》见附

件。

购买三证齐全，可接受

灵敏度高特异性

强的试剂用于样

本检测。要求用

三证齐全已灭活

的室内质控品，

对外部室间质评

标本按照《全国

艾滋病检测技术

规范》2009进行。

已制订《实验室

火灾、水灾、地

震自然灾害事故

处置程序》、《意

可接受

7.人员岗位仅限于本

7.1未经培训实验室

的技术人员，

无证上岗。

7.2人员健康

状况低下，易

感性高。

7.3实验操作

时个人防护装

备不全或破损

未及时更换。

8.外来供应品

需求

8.1检测试剂

灵敏度低，阳

性漏检。

8.2检测未经

灭活的质控品

对仪器环境造

成污染。

9.水、电、火

灾及自然灾

害。

9.1自来水管

仅限于本

实验室

一般很短较低

仅限于本

实验室

一般很短较低

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暴裂，污染物

随水外泄。

9.2电源线破

露造成触电。

9.3电器、电源

老化，用火不

当等发生火

灾。

9.4发生地震

等自然灾害。

9.5化学品安

全。

10.误用仅限于本

10.1样本误实验室

用：HIV阳性标

本被当作阴性

标本使用。

10.2消毒剂误

用：消毒时将

不同浓度消毒

液用错，达不

到消毒效果。

10.3紫外线开

启时人员不知

情进入造成伤

害。

11.恶意使用

HIV阳性标本

被盗、被抢用

于损害他人的

恐怖活动。

涉及范围

较广

一般很短较低

外事故处理管理

程序》（见附件）。

已制定《危险品

管理程序》见附

件

已建立《实验室

安全保卫制度》

对保管阳性标本

冰箱实行双人双

锁，并设有明显

的标识。

已制定《消毒剂

配制标准操作程

序》对不同浓度

都有明显的标

识，并对消毒剂

的使用做出明确

规定。

紫外线使用时，

设使用置标识，

防止误入。

制定《实验室安

全保卫制度》对

保管阳性标本的

冰箱双人双锁，

设有监控，一但

发生立即启动

《实验室生物安

全应急预案》

可接受

很严重很长极低可接受

7、应急措施

7.1本实验室制定有《实验室生物安全应急预案.》组织健全，人员分工明确，一旦发生生

物安全事故立即启动预案。

7.2实验室安全培训：每年请消防队警官做1次消防安全知识和自救知识培训。

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7.3预防演练：每年至少进行一次生物安全事故和水灾、火灾、自然灾害进行一次模拟演练。

7.4应急设施：设紧急濆淋装置、洗眼器各1个，是应对标本溅洒污染实验人员皮肤和眼睛

而采取的应急措施。

7.5设有急救药箱，还配有二氧化碳灭火器等消防设施

8、评估结论：为加强HIV实验室生物安全管理，保护实验室工作人员和公众的健康，所以

对HIV抗体初筛实验室进行风险评估。在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》

中将此病毒列为第二类病原微生物，属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的

慢病毒属，根据《名录》的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行。本

实验室是按二级生物建设和装备的HIV抗体初筛实验室，应用ELISA方法进行血清HIV抗

体筛查。本次评估是从HIV病毒生物因子的特性开始，并对实验室常规活动和非常规活动存

在的风险和潜在的风险进行评估，并对所能产生的风险制定了相应的消除、减少或控制风险

的管理措施和技术措施，并对所涉及的设施、设备、人员进行了评估，制定了一系列相应文

件，已经将可知和未知的风险降到了可接受程度，实验室具备开展HIV抗体初筛的能力。

9、.主要参考文献

9.1倪语星，尚红.主编临床微生物学与检验.人民卫生出版社，2008

9.2叶应妩，王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京东南大学出版社，2006

9.3贾文祥主编.医学微生物学.人民卫生出版社，2001

9.4耿贯一主编.流行病学（第四版）.人民卫生出版社，1997

9.5中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范2009年修订版

9.6丛黎明主编.二级生物实验室建设与管理.浙江文艺出版社,2008

9.7许钟麟，王清勤主编.生物安全实验室与生物安全柜.中国建筑工业出版社

9.8《病原微生物实验室生物安全管理条例》，中华人民共和国国务院令第242号

9.9《生物安全实验室建筑技术规范》GB50346-2004

9.10卫生部《消毒技术规范》，2002年版

9.11《云南省德宏州2004-2009年艾滋病病毒职业暴露状况分析》《中国艾滋病性病》2011

年第2期

9.12HIV实验室生物安全2011(1).8.8（PPT）百度文库.荆门市疾病预防控制中心艾滋病

初筛实验室