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10报告

根据检测结果，出具报告。

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附录A

（规范性附录）

猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1型病毒的多重PCR检测

采用PCR方法，特异性扩增猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2

基因序列以及猫1型疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列，用于猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1

型病毒的多重检测。

A.1RNA和DNA的提取

按照试剂盒说明书分别提取病毒RNA和DNA。将RNA反转录为cDNA。将提取的DNA和反转

得到的cDNA于-20℃保存、备用。

A.2PCR反应

以FCV的cDNA和FPV、FHV-I的DNA混合物作为多重PCR的模板进行PCR扩增，扩增

引物见表1，PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，

30个循环；72℃10min。

表A.1

Primers

FPV

多重PCR引物序列

Length

392bp

Sequences(5'-3')

ATGGTTGGTGACTCTTTGTTT

TACATTTGATTGACACTTCCC

FCVAACCTGCGCTAACGTGCTT

CAGTGACAATACACCCAGAA

922bp

FHV-IGACGTGGTGAATTATCAG

CAACTAGATTTCCACCAGG

290bp

A.3PCR产物

1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

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附录B

（规范性附录）

猫冠状病毒RT-PCR检测方法

采用RT-PCR方法，特异性扩增猫冠状病毒ORF1b基因片段，用于猫冠状病毒的检测。

B.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成

按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将

RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。

B.2PCR反应引物

上游引物序列（5’-3’）：GTGATGCTATCATGACTAG

下游引物序列（5’-3’）：CACCATTACAACCTTCTAA

B.3PCR反应条件

95℃预变性2min；95℃变性30s，48℃退火35s，72℃延伸45s，30个循环；72℃延伸5min。

B.4PCR产物

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为417bp。

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附录C

（规范性附录）

猫白血病病毒巢式RT-PCR检测方法

采用巢式RT-PCR方法，特异性扩增猫白血病病毒基因片段，用于猫白血病病毒的检测。

C.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成

按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将

RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。

C.2

C.2.1

PCR反应引物

第一次反应引物

上游引物序列（5’-3’）：ACAGCAGAAGTTTCAAGGCC

下游引物序列（5’-3’）：GACCAGTGATCAAGGGTGAG

C.2.2第二次反应引物

上游引物序列（5’-3’）：GCTCCCCAGTTGACCAGAGT

下游引物序列（5’-3’）：GCTTCGGTACCAAACCGAAA

C.3

C.3.1

PCR反应

第一次PCR反应

以制备的cDNA为模板，进行第一次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃

退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。

C.3.2第二次PCR反应

以第一次PCR产物为模板，进行第二次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，

58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。

C.4PCR产物

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为601bp。

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附录D

（规范性附录）

猫免疫缺陷病毒巢式RT-PCR检测方法

采用巢式RT-PCR方法，特异性扩增猫免疫缺陷病毒pol基因片段，用于猫免疫缺陷病毒的检测。

D.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成

按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将

RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。

D.2

D.2.1

PCR反应引物

第一次反应引物

上游引物序列（5’-3’）：TGGCCWYTAWCWAATGAAAARATWGAAGC

下游引物序列（5’-3’）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC

D.2.2第二次反应引物

上游引物序列（5’-3’）：TGAAAARATWGAAGCHTTAACAGAMATAG

下游引物序列（5’-3’）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC

D.3

D.3.1

PCR反应

第一次PCR反应

以制备的cDNA为模板，进行第一次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃

退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。

D.3.2第二次PCR反应

以第一次PCR产物为模板，进行第二次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，

58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。

D.4PCR产物

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为578bp。

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附录E

（规范性附录）

猫血巴尔通体PCR检测方法

采用PCR方法，特异性扩增猫血巴尔通体16SrDNA基因片段，用于猫血巴尔通体的检测。

E.1DNA的提取

按照DNA提取试剂盒操作方法进行，提取的DNA于-20℃保存、备用。

E.2PCR反应引物

上游引物序列（5’-3’）：TCACAATGGACGAAAGTCTG

下游引物序列（5’-3’）：CCAAACATCTCAAGACACGAG

E.3PCR反应

以提取的DNA为模板，进行PCR反应，条件如下：

95℃预变性2min；95℃变性15s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min。

E.4PCR产物

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为711bp。

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